槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识.ppt

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1、实验二槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识目的要求学习和掌握芸香苷的提取及检测技术学会利用芸香苷的水解作用制备糖类及苷元实验原理芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖脱水缩合形成的苷。[芸香糖（Rutinose）为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖。实验原理纯品为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174-178℃。微

2、溶于水，易溶于醋酸乙酯等,不溶于丙酮、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。实验原理芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗（但不能降压）剂，亦可防治因缺芦丁所致的其它出血症。多作口服，也可作注射用。实验原理提取芦丁的方法很多，目前我国多采用碱提取-酸沉淀法。该法的提取原理是依据芦丁结构中含有酚羟基，能与碱反应生成盐而溶于水中，向此盐溶液中加入酸，则芦丁游离析出。此外，还可以采用水或醇提取法。芸香苷的提取方法Ⅰ：水提取法槐花米粗粉20g加10倍量沸水煮沸20min，反复2次，趁热脱脂棉滤过药渣滤液静置过夜，滤过滤液芸香苷粗品方法Ⅱ

3、：碱溶酸沉法芸香苷的提取（粗提）槐花米粗粉20g加0.4％硼砂水200ml，石灰乳调pH8～9煮沸30min，趁热抽滤或4层纱布过滤滤液药渣放冷至60～70℃，浓盐酸调pH2～3，冰箱中析晶，抽滤滤液沉淀室温下晾干芸香苷粗品芸香苷粗品2g加蒸馏水400ml，煮沸溶解15min趁热抽滤滤液药渣滤液静置析晶，抽滤结晶精制芸香苷室温下晾干芸香苷的提取（精制）槲皮素精制品精制芸香苷加2％硫酸50ml，加热回流40min，至沉淀不再增加为止，放冷抽滤沉淀滤液用少量水洗去余酸，晾干加氢氧化钡中和至中性，滤过槲皮素粗品硫酸钡沉淀滤液95％乙醇重结晶浓缩至干，加2～3ml乙醇溶解糖供试液芸香苷

4、的水解芸香苷、槲皮素及糖的检识实验名称实验试剂现象芸香苷槲皮素Molish反应10%α-萘酚乙醇紫色环无现象溶液-浓硫酸盐酸-镁粉反应盐酸-镁粉红色～紫红色醋酸镁反应1％醋酸镁甲醇黄色荧光（紫外灯）溶液（滤纸）三氯化铝反应1％三氯化铝乙黄色荧光醇溶液（紫外灯）锆-柠檬酸反应2％二氯氧锆甲醇溶液黄色并黄色2％柠檬酸甲醇溶液3～4滴褪色不褪色芸香苷、槲皮素及糖的检识1、酸性试验：取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2ml，振摇后观察各管溶解情况。溶解

5、的溶液应呈黄色。再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊。芸香苷、槲皮素及糖的检识2、Molish反应：取试样1mg置小试管中，加乙醇0.5ml溶解，加α-萘酚试剂1~2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫酸约0.5ml静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和槲皮素的不同。芸香苷、槲皮素及糖的检识3、盐酸-镁粉反应：取芸香苷1mg，加乙醇2ml，在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-

6、羟基与糖结合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈还原显色反应。因此可区别两者。芸香苷、槲皮素及糖的检识4、三氯化铝反应：取样品1mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。5、锆-柠檬酸反应：取样品1mg，加甲醇2ml，在水浴上加热溶解，再加2%二氯氧锆甲醇溶液3~4滴，凡有3-羟基或5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲醇溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香苷和槲皮素的不同。芸香苷、槲皮素及糖的检识6、Fehling试验：取试样数mg，溶于0.5ml热水中，加斐林氏试剂甲、乙等量混合液2ml，沸水浴上加热，如产生氧化亚铜的暗

7、红色或黄色沉淀表示有还原糖或其它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以10%NaOH中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和槲皮素的不同。注意事项1．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷易于被热水溶出。2．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。1、计算芦丁的得率2、