3平面色谱技术.ppt

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1、1高等仪器分析3、平面色谱23.1平面色谱类型薄层色谱纸色谱薄层电泳3吸附剂或载体的选择及薄层的制备薄层的预处理点样样品的制备色谱前衍生化薄层板预平衡展开定位定性定量平面色谱操作过程载体：滤纸（纤维素），可吸附~22%水，其中~6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子　　　　　之间的偶极作用）形成固定相纸~22%H2O~6%H2O固定相流动相SSSSSSS纸色谱属于分配色谱------正相和反相分配纸色谱纸色谱薄层分离机制主要应用范围氧化铝板吸附脂肪和芳香化合物、生物硅胶板吸附碱、甾类、萜类改性硅胶C2,C8,C18RP正相、反相非极

2、性物质、极性物质CN板正相、反相农药、酚类、甾类NH2板正相、反相、核苷酸、农药、酚类、甾类、阴离子交换维生素类、嘌呤衍生物纤维素分配氨基酸、梭酸乙酰纤维素正相、反相蒽醌类、抗氧化剂离子交换剂阴、阳离子交换氨基酸、梭酸、氨基糖、肽聚酰胺分配黄酮类、酚类葡聚糖凝胶凝胶过滤蛋白质、核苷酸薄层色谱7带电荷的分离物质(蛋白质、核苷酸、多肽、糖类等)在纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶等支持介质上，向与其相反的电极方向以不同速度泳动(或迁移)而实现分离，然后对组分进行定性和定量的方法。薄层电泳83.2平面色谱参数比移值Rf=L/L09相

3、对比移值组分与参考物质在同一条件下的Rf值(或移行距离)之比SAlalsl0原点前沿薄层色谱Rr值的示意图Rr=Rf(a)/Rf(s)=La/Ls可以消除系统误差，重现性和可比性都比Rf好Rr可以大于1，也可以小于110分配系数K和容量因子k相平衡参数11定义：在相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0和Rf=1两种组分斑点之间能容纳的色谱斑点数。分离参数分离数(separationnumber;SN)分离数是衡量平面色谱分离容量的主要参数，也是面效的评价参数。分离度计算公式:SN=L0/(b0+b1)-1b0,b1:Rf=0和Rf=

4、1的组分的半峰宽理论塔板数，塔板高度理论塔板数(numberoftheoreticalplate;n)反映组分在固定相和流动相中动力学特性的色谱技术参数，代表色谱分离效能的指标。面效参数n=16(L/W)2塔板高度(heightoftheoreticalplate;H)塔板高度是由理论塔板数及原点到展开剂前沿的距离(L0)算出的单位理论塔板的长度。计算公式：H=L0/nH与n成反比，n值越大，H值越小。1)薄层板(1)载体：硅胶：表面带有硅醇基，pH=4.5，经150℃活化脱水后，4~6个硅醇基/nm2(2)薄层参数：①厚度：普通薄层

5、高效薄层制备薄层0.25mm0.2mm0.5~2mm②活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示,它随含水量的增加而减弱3.3平面色谱固定相活度级别含水量Ｗ％吸附力硅胶氧化铝Ⅰ－－增强Ⅱ１０３Ⅲ１２６Ⅳ１５１０Ⅴ２０１５硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系(3)粘合剂与添加剂①粘合剂a.煅石膏（CaSO4·2H2O)：120~140℃烘烤2~4h,过200目筛，密闭备用。b.梭甲基纤维素钠（ＣＭＣ-Ｎa)：0.2~1.0%②添加剂a.荧光指示剂ZnSO4:Mn254nmZnS·CdS:Ag366nmb.酸、碱或缓冲液c.硝酸银溶液Ｒ：饱合

6、化合物炔烃反式烯烃顺式烯烃(4)薄层的制备方法①手工制板a.软板b.硬板(含粘合剂)匀浆涂布凉干活化②预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板a.普通薄层预制板------硅胶、氧化铝、纤维素、硅藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相板b.高效薄层预制板------氨基、氰基键合硅胶板、手性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝-纤维素、纤维素-硅胶、硅藻土-硅胶等）(5)薄层板的活化吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质R值就小。①活化：105

7、~120℃干燥0.5~1hⅡ~Ⅲ级②活度的标定：a.氧化铝薄层活度的标定染料溶液的配制：称取偶氮苯30mg和对-甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各20mg溶于四氯化碳50ml中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液20μl点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的R，由下表中确定薄板的活度级别。染料活度级别（R值）ⅠⅡⅢⅣ偶氮苯0.590.740.850.95对-甲氧基偶氮苯0.160.490.690.89苏丹黄0.010.250.570.78苏丹红0.000.100.330.56对-氨基偶氮苯0.000.030.080.

8、19氧化铝薄层的活度级别b.薄层活度的标定染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹Ⅲ）各20mg溶于1ml氯仿中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷-乙酸乙酯（9：1）展开，三种染料