平面色谱LXL.ppt

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1、第十九章平面色谱法主要内容：一、平面色谱法的分类和原理二、平面色谱法参数三、薄层色谱法一：分类和原理主要包括:薄层色谱法和纸色谱法薄层色谱法：将固定相均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法。按分离效能又可分为:经典薄层色谱法高效薄层色谱法纸色谱法：以纸作为载体的色谱法，分离原理属于分配色谱的范畴。薄层电泳法二、平面色谱法参数(1)：定性参数(2)：相平衡参数(3)：面效参数(4)：分离参数(1)：定性参数1、比移值(Rf)2、相对比移值(Rr)1、比移值(Rf)比移值(Rf

2、):溶质移动距离(L)与流动相移动距离(L0)之比.在薄层色谱法中，一般采用定时展开(定时洗脱)，即观测在同一展开时间内组分与展开剂迁移的距离。Rf=0(组分不随流动相移动)Rf=1(组分随展开剂至前沿)说明:由于组分被保留在薄层固定相上，它的迁移速度总是小于展开剂的迁移速度，u＜u0，组分的迁移距离也总是小于展开剂的迁移距离，l＜l0，因此，Rf≤1。(不被固定相保留的组分Rf=1)。实践中，Rf值的最佳范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。1：比移值(Rf)比移值的影响因素比移值是薄层色谱的基本定性参数，

3、它说明组分在色谱系统中的保留行为。需满足下述条件才能获得真实的Rf值：①展开室密闭不泄漏，薄层板周围空间被展开剂蒸气所饱和，无边缘效应；②沿分离轨迹，固定相与流动相均无梯度变化；③展开剂的前沿位置能正确测定。比移值的数值除与组分的性质有关外，还与薄层板的性质(活性等)、展开剂的性质(极性、组成等)和温度有关。1、比移值(Rf)2、相对比移值(Rr)建议采用相对比移值(relativeRf；Rr)作为定性参数。采用相对比移值，参考物质与组分在完全相同的条件下展开，能消除系统误差，因此Rr值的重复性和可靠性都比Rf值好。1

4、、对照品2、样品12黄酮参考物质参考物质可以是加入样品中的纯物质，也可以是样品中的某一已知组分。相对比移值表示的是组分与参考物质的移行距离之比，其值的大小不仅与组分及色谱条件有关，而且还与所选参考物质有关。与Rf值不同，Rr值可以小于1，也可以大于1。2、相对比移值(Rr)(2):相平衡参数1、分配系数与比移值的关系2、影响比移值的因素R′是组分分子在展开剂中出现的几率，(1-R')是组分分子在固定相中出现的几率，则即：1、分配系数与比移值的关系1、分配系数与比移值的关系组分分子在薄层板上的移动速度是展开剂移动速度的R

5、′倍，即R′＝u/u0；由比移值的定义可知Rf=L/L0=u/u0，比移值与组分分子在展开剂中出现的几率在数值上相等，所以Rf=R′。由或得:2、影响比移值的因素Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关；色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为.1）K↑，Rf↓2）薄层板一定，对于极性组分展开剂极性↑，Rf↑（容易洗脱）展开剂极性↓，Rf↓（不容易洗脱）3）Rf范围：0

6、在固定相和流动相中动力学特性的技术参数，是代表色谱分离效能的指标。n=16(L/W)2L：原点到斑点中心的距离W：组分斑点的纵向宽度平面色谱法中,理论塔板数主要取决于色谱系统的物理特性，如固定相的粒度、均匀度、活度及展开剂的流速及展开方式等.2、塔板高度塔板高度是由理论塔板数及原点到展开剂前沿的距离(L0)算出的单位理论塔板的长度。H=L0/n(4)：分离参数1、分离度(resolution；R)2、分离数(separationnumber；SN)1：分离度(resolution；R)两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度

7、(直径)的比值，称为分离度或分辨率，分离度是平面色谱法的重要分离参数。2：分离数(separationnumber；SN)分离数是衡量平面色谱分离容量的主要参数。也是面效的评价参数。分离数是在相邻斑点分离度为1.177时，Rf＝0和Rf＝1之间能容纳的色谱斑点数。三、薄层色谱法主要类型：（一）：吸附薄层色谱法（二）：分配薄层色谱法(一)：吸附薄层色谱法吸附薄层色谱法:固定相为吸附剂的薄层色谱法分离原理:各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附能力差异而实现分离.吸附系数大的组

8、分在板上移动的速度慢，Rf值小；在吸附色谱中，一般极性大的组分移动的速度慢，极性小的组分移动的速度快。例：抗宫炎片中黄酮化合物薄层色谱图1、对照品2、样品12黄酮吸附剂：硅胶G展开剂：正丁醇:醋酸:水(4:1:5)显色剂：1%三氯化铝(一)：吸附薄层色谱法(二)：分配薄层色谱法分配薄层色谱法:利用样品中各组分在固定相与流动相之间的