《平面色谱》PPT课件

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1、薄层色谱法thin-layerchromatographyTLC薄层色谱法把吸附剂均匀地铺在一块光洁的玻璃板或其他薄板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离分析的方法。特点：1.设备简单，操作方便。2.分离的组份可保存在薄板上。3.对试样净化要求低，试样间相互无交叉污染。第一节薄层色谱法的原理薄层色谱法按固定相的性质和分离机理分为：吸附薄层色谱法，分配薄层色谱法，离子交换薄层色谱法，凝胶薄层色谱法。吸附薄层色谱法：以吸附剂为固定相，溶剂为流动相（又为展开剂）的液相色谱法。分离机理：在薄层的一端点上试样溶液，然后把薄层的下端浸入合适的溶剂中，借助毛细管作用使

2、溶剂上升。此时试样组分不断地被吸附，又被溶剂溶解解吸，如此随之向前移动，这一过程为展开。由于吸附剂对不同组份有不同的吸附能力，展开剂也有不同的解吸能力，因此在流动相向前流动的过程中，不同组分移动的距离不同，从而得到分离。比移值示意图溶剂前沿起始线abcAB比移值：表示各组分在薄层板上的位置，是定性的参数。Rf=原点至组分斑点中心的距离/原点到流动相前沿的距离比移值与容量因子和分配系数的关系：为反比关系Rf值在0—1之间，合适的Rf值为0.2—0.8，最佳Rf值为0.4—0.5相对比移值：将试样与参照物同时展开，可消除一些系统误差，用于定性结果准确。

3、Rst=原点到组份斑点中心的距离/原点到参照物斑点中心的距离若A为试样，B为参照物，Rst=a/b注意：Rst＞1或Rst＜1分离度：R=2△d/w1+w2△d—两组分斑点中心距离w1、w2分别为两斑点宽度R＞1为两组分斑点分离的标志固定相TLC对固定相的要求；1、表面积要大，2、在展开剂中不溶，3、具有可逆的吸附性，4、便于观察分离结果。固定相的选择：根据被分离化合物的性质来选择合适的固定相对于强极性试样，应用活性低的吸附剂；对于弱极性试样，应用活性高的吸附剂。分离亲脂性化合物常选择氧化铝、硅胶等。分离亲水性化合物常选择纤维素、离子交换树脂、硅藻土及

4、聚酰胺等。注意：吸附剂的酸碱性应与试样保持一致，以防止吸附剂与试样组份发生酸碱反应而产生不可逆吸附。流动相（展示剂）选择合适的流动相是TLC离的关键。要求：1、能使待测组份很好地溶解，不与组份发生化学反应。2、使展开的斑点园而集中，无拖尾现象。3、使待测组份的Rf值最好在0.4-0.5之间，各组份Rf应大于0.05，以便完全分离。流动相的选择原则：相似性原则。通过实验找出最佳分离的展开剂。实验时，首先用单一的低极性溶剂展开，后再更换极性大的溶剂。用单一溶剂不能分离时，可用两种或两种以上的混合展开剂。常用单一溶剂的极性顺序：已烷（石油醚）二＜硫化碳＜苯四氯

5、化碳＜二氯甲烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜丙醇＜甲醇＜水常用的混合展开剂：水—乙醇，水—甲醇，水—丁酮—甲醇，水—乙醇—丁酮—乙酰丙酮等。注意：混合溶剂临用时新配，以免时间贮存，因相互作用而变质。为了找到最佳溶剂系统，可采用三角形优化法。三角形优化法固定相活性级别待测物极性极性展开剂VI注：活性级别越小，吸附力越大强强薄层色谱法的基本技术步骤：制板、点样、展开、显色定位、定性、定量。制板：软板：用硅胶H（不加粘合剂）硬板：用硅胶G（加粘合剂煅石膏）用硅胶CMC（加粘合剂羧甲基纤维素）用硅胶F254（加荧光剂）要求：吸附剂涂铺均匀，表面光滑，厚度一致。注意：涂

6、铺后的薄板应水平放置，室温晾干，干燥活化。（活化温度、时间可根据活性要求变化。硅胶G板在110℃烘干1小时。）点样试样溶于适当溶剂中，尽量避免用水。常用乙醇、甲醇配备，试样溶液浓度为0.01%-0.1%。点样用管口平整的毛细管或平头微量注射器。试样溶液点在距薄层底边约2cm处，点样直径不超过5mm，点间距为1-1.5cm。1、点样应在干燥的条件下完成，点样时间不超过10分钟。2、点样时要原点的直径一致，点间距要精确，以确保定量分析的准确性。3、点样时宜分次点样，每次点样后必须干燥后再点第二次。4、若试样中欲测成份含量太低或含有的杂质使展开后的背景太深时应

7、进行萃取分离或点样前的衍生化处理。注意展开点样后的薄层板要置于密闭的玻璃层析槽中用合适的展开剂展开。展开方式：软板只能进行水平展开。硬板可采用近水平、上行、下行、双向、多次展开。注意1、点样处不能浸入展开剂中。2、展开距离一般为10-15cm，取出薄层板在前沿作记号。3、展开过程中要恒温恒湿。4、当使用极性相差较大的多组份混合展开剂时，要防止边缘效应。边缘效应边缘效应：薄层边缘处由于展开剂中非极性成份较易挥发而使比移值比薄层中间部位增大的现象。产生原因：展开槽内溶剂蒸气未达饱和，造成展开剂的蒸发速度在薄板两边与在中间部分不等。展开剂中极性较弱和沸点较低的

8、溶剂在边缘挥发得快，致使边缘部分的展开剂中极性溶剂比例增大，故比移值相对较大。显