平面色谱技术02.ppt

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1、薄层色谱简介陈新2006.08QC基础技能1QC基础技能主题一﹑原理二﹑固定相三﹑展开剂四﹑操作方法五﹑定性分析六﹑定量分析七﹑Rf值与化学结构关系2一﹑原理1﹑薄层色谱法是把吸附剂（或载体）均匀地铺在一块玻璃板、铝箔或塑料板上形成薄层,在此薄层上进行色谱分离,称为薄层色谱法。待分离的样品点在薄层的一端，在密闭的容器中，用适宜的流动相或展开剂展开。由于吸附剂对不同的吸附力大小不同，易被吸附的组分移动地慢一些，而较难被吸附的组分流动地快一些。经过一段时间的展开，不同的物质彼此分开，最后形成互相分离的斑点。32﹑将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，

2、并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。3﹑薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。44﹑比移值（R)：溶质移动距离与流动相移动距离之比A，B为样品溶液点样的位置，如图1所示：A物质的Rf=;B物质的Rf=;所以Rf值与K之间关系可用下式表示：Rf=原点至溶剂前沿的距离原点至斑点中心的距离=Rf起始线abcAB溶剂前沿图1、Rf值的测量示意图acbc11+kVsVm5在一定色谱条件下，Rf值为常数，其值在0~1之间，若某组分Rf=0，表示它不随展开剂移动，吸附剂对它的吸附力很强，留在

3、原点不动。若Rf=1，表示吸附剂对它基本不吸附，随着展开剂到达溶剂前沿，K=0。Rf值越小，表示该组分K越大，极性越大。根据物质的化学结构不同，极性不同，在同一薄板上展开，我们能预测它们的Rf值大小。65、分离度（Rs）衡量分离效果的指标可用分离度Rs表示，其定义为，相邻两斑点的斑点中心至原点的距离之差与两斑点的宽度总和之半的比值，即如图2所示：L1L2W1W2图2、薄层色谱的分离度测定Rs=L2-L1（W1+W2）/27二、固定相薄层色谱法所用的固定相最常用的是硅胶。粒度要求比柱色谱更细，普通薄层硅胶粒度在40um左右，展开10~15cm。

4、高效薄层色谱硅胶粒度小至10um，5um，展开距离为5cm左右。薄层色谱展开后的斑点一般都比较集中。8三、展开剂薄层色谱法中选择展开剂的一般规则与吸附柱色谱法中选择流动相的规则相同。极性大的样品需用极性较大的展开剂，极性小的样品用极性小的展开剂。通常先用单一溶剂展开，根据被分离的物质在薄层上的分离效果，进一步考虑改变展开剂。一般希望Rf值在0.2~0.8之间，如果值较大，斑点都在前沿附近，则应加入适量极性较小的溶剂（如环己烷，石油醚等）以降低展开剂的极性。9调节被测组分的Rf值大小，除可改变展开剂的极性外，还可通过改变板的活度来到达。一般薄层

5、板的活化温度为105℃，活化1h，若要降低板的活度，可通过降低板的活化温度如105℃降为80℃、60℃，均可达到降低板的活度目的。在活度小的板上，吸附剂对各组分的吸附力小，而Rf值会升高。10四、操作方法薄层色谱法一般操作程序可分为制板、点样、展开和显色4个步骤。11吸附剂或载体的选择及薄层的制备薄层的预处理点样样品的制备色谱前衍生化薄层板预平衡展开定位定性定量平板色谱法操作流程图121、制板制备薄板所用的玻璃板必须表面光滑、清洁，不然吸附剂不易涂布，同时可能影响分离和检测；其大小可根据实际需要自由选择，小至载玻片，大的用20cm×20cm玻

6、片。薄板可分为加粘合剂的硬板和不加粘合剂的软板两种。13a.软板的制备将吸附剂撒在玻璃板的一端，另取比玻璃板宽度稍长的玻璃管，在管的两端各包上橡皮膏，也可以套上塑料管或橡皮管，其厚度即为薄层的厚度。b.硬板的制备硬板即粘合薄层，即在吸附剂中加入粘合剂。常用的粘合剂有羧甲基纤维素钠（CMC-Na)和煅石膏(CaSO4·1/2H2O)。14硅胶-CMC-Na板制备：取CMC-Na7.5g加1000mL水，加热使溶解，放置使澄清。取上清液100mL，分次加入硅胶约33g，调成糊状。将糊状的吸附剂倒在清洁的玻璃板上，使均匀流布于整块玻璃板上，平放自然

7、晾干，105℃活化1h，置干燥器中备用。152、点样将样品溶于适当溶剂中，尽量避免用水，因为水溶液斑点易扩散，且不易挥发除去，一般用乙醇、甲醇等有机溶剂。若为液体样品，可直接点样。原点直径为2~4mm，溶液宜分次点加，每次点加后，使其自然干燥，或用电吹风机促其迅速干燥，只有干后，才能点第2次。16点样工具一般采用毛细管或微量注射器，点样时必须注意勿损伤薄层表面，进行薄层定量时，用毛细管点样时最好不与薄层直接接触。点样量一般以几微升为宜。173、展开展开缸一般为长方形密闭玻璃缸，粘合薄层常用上行法展开，将薄层板直立于盛有展开剂的色谱缸中，展开剂

8、浸没薄板下端的高度不超过0.5cm，薄板上的原点不得浸入展开剂中。待展开剂前沿达一定距离，如10~20cm时，将薄层板取出，在前沿处作标记。使展开剂挥散后，显色。1