血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳.ppt

《血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳目的了解电泳技术的一般原理，学习醋酸纤维薄膜电泳的操作实验原理带电粒子（为胶体粒子）在电场中向与自身带相反电荷的电极移动，称为电泳。不同物质由于带电性质不同，因而在一定的电场强度下移动的速度不同。以氨基酸为例：qU=─mv212在某种pH下，某一AA可显电中性，即带着相等的正负离子（呈兼性离子），此时若在电场中，这一AA既不向正极移动，也不向负极移动，这一pH值被称为这一AA的等电点，以PI表示，AA是一种典型的两性电解质。一个混合的蛋白质样品由于各蛋白质的等电点不同，在相同的pH溶液

2、中所带的电荷性质不同，电荷的数目不同，在电场中各种蛋白质泳动的速度和方向也不相同。从而使蛋白质混合样分离开来。溶液的pH值：溶液的pH值决定了带电颗粒的解离程度，也决定了物质所带净电的多少。对蛋白质和氨基酸等两性电解质而言，pH值离等电点越远，颗粒所带净电荷越多，泳动速度也越快，反之越慢。因此，分离某一蛋白质混合物时，应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差异的pH值，以利于各种蛋白质的分离。为使电泳过程中溶液的pH值恒定，必须使用缓冲溶液。本次实验使用的是巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液。pH为8.6。醋酸纤维电泳的特

3、点优点：简单、快速、定量等，区带清晰，灵敏感度高，便于保存和照相。缺点：较聚丙烯酰胺电泳分辨率低。聚丙烯酰胺电泳有两重效用：电泳和分子筛。实验步骤1.平衡选择质地均匀的膜条浸透在缓冲液中10分钟左右，取出用滤纸吸干多余的水份。2.点样识别出光泽面与无光泽面，平放于滤纸上，在无光泽面距膜一端2cm处用点样器点样。点样一定要均匀。这是实验成败最关键的一步。３.电泳点样一面朝上，放入电泳槽中，点样端放在阴极，调节电流，电泳时间约1小时左右或在点样处点一点溴酚兰作为指示。电流强度为：0.7mA/cm膜宽，每片膜宽约2c

4、m左右。每个电泳槽大概放十片膜，因此电流开始时预电流为10mA左右，十分钟后调到18mA。４.染色电泳完毕后将膜条取下放在染色液中染色10分钟。染色液为氨基黑10B。５.漂洗将膜条从染色液中取出放置漂洗液中，漂洗数次至条带清晰为止。结果分析各蛋白质pI如下：白蛋白（A）4.88α1球蛋白5.06α2β——球蛋白5.12γ——球蛋白6.85—7.31.定量测定:可将膜条用滤纸压平吸干，按区带分段剪开，分别浸在浓度0.4mol/L氢氨化钠溶液中，并剪取相同大小的无色带膜条作空白对照，进行比色。或者将干燥的电泳图谱膜

5、条放入透明液中浸泡2~3min后取出贴于洁净玻璃板上，干后即为透明的薄膜图谱，可用光密度计直接测定。2.定性：绘图，照相结果处理