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时间:2020-02-01
《醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白.ppt》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、实验七醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白一、原理蛋白质是两性电解质。当PH>PI时,蛋白质为负离子,在电场中向阳极移动;当PH2、、实验仪器1、牛血清2、醋酸纤维薄膜3、镊子4、电泳仪5、电泳槽6、盖玻片三、实验试剂1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液(离子强度,PH8.6):称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g,溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计较正后使用。2、染色液:氨基黑10B0.5g,甲醇50ml,冰乙酸10ml,蒸馏水40ml混匀即可。3、漂洗液:95%乙醇45ml,冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。四、试验步骤1、准备:用镊子取薄膜一条,浸入缓冲液中,完全浸透后(大约3-5分钟),用镊子取出,将无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,将滤纸对折,吸取3、多余的缓冲液(注意不要吸的太干)。2、点样:取盖玻片一块,用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上,直直的在薄膜一端1/3处点样。3、电泳:将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上,无光泽面要向下放置,点样端放在阴极,进行电泳。电泳条件:电压90-110V,电流0.4-0.6A,通电60分钟。4、染色:电泳完毕,将薄膜浸入染色液(回收)中10分钟,进行染色。5、漂洗:染色完毕,将薄膜取出,放入漂洗液中漂洗至背景无色,在浸入蒸馏水中。6、图谱观察:观察图谱,将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验报告纸上。注意事项请带试验的老师试验结4、束后,将镊子回收。醋酸纤维薄膜在光下面能明显区分有光泽面和无光泽面。电泳槽中间为正极,两端为负极。染色液请用完后回收到原来的试剂瓶中。漂洗薄膜时,请做到“少量多漂”,即用少量的漂洗液去漂洗薄膜,多漂几次,这样既不浪费漂洗液,还达到了漂洗的效果。实验十二维生素C的定量测定(2,6-二氯靛酚滴定法)一、原理维生素c又称为抗坏血酸,其还原型能还原染料2,6-二氯靛酚钠盐,本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中,2,6-二氯靛酚成红色,被还原后变为无色。因此可用2,6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C,当样品中的维生素C被完全还原后,在滴加过量5、的2,6-二氯靛酚,溶液变为淡红色,即为终点。如无其他杂质干扰,则样品液所还原的2,6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。二、实验仪器新鲜水果吸管容量瓶滴定装置锥形瓶研钵漏斗三、实验试剂1、2%草酸溶液:草酸2g,溶于100ml蒸馏水。2、1%草酸溶液:草酸1g,溶于100ml蒸馏水。3、标准维生素C液:准确称取10.0mg维生素C,溶于1%草酸溶液,并稀释至100ml,贮于棕色瓶中,冷藏,最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.4、0.1%2,6-二氯靛酚溶液:称取500mg2,6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg6、碳酸氢钠的热水中,冷却,加蒸馏水并稀释至500ml,滤去不溶物,贮于棕色瓶中,冷藏。四、实验步骤1.样品中抗坏血酸的提取:将水果用水洗干净,用滤纸吸取表面水分。称取2.0g,加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。直接将浆状物,倒入50ml容量瓶中,用2%草酸溶液稀释并定容,混匀,静止10分钟,过滤(最初数毫升滤液弃去),滤液备用。2.滴定1)标准液的滴定:准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml于100ml锥形瓶中,加9ml1%草酸溶液,用2,6-二氯靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。有所用2,6-二氯靛酚的体积算出1ml染料相当于7、多少毫克抗坏血酸。2)样品液的滴定:准确吸取滤液两份,每份10ml,分别放入两个100ml锥形瓶中,滴定方法同上。(2,6-二氯靛酚用完后,请回收回原来的试剂瓶中)五、结果计算按下式计算100mg样品中含抗坏血酸的毫克数:m=V*T/W*100V=滴定时所用染料ml数T=每毫升染料氧化抗坏血酸质量W=10ml样液相当于含样品的质量数注意事项1、滴定过程宜迅速,一般不超过2min。2、滴定所用染料一般不应少于1ml或多于4ml,如果样品中含抗坏血酸太高或太低时,可酌量增减样液。3、研磨时要尽量研磨成浆状物。
2、、实验仪器1、牛血清2、醋酸纤维薄膜3、镊子4、电泳仪5、电泳槽6、盖玻片三、实验试剂1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液(离子强度,PH8.6):称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g,溶于蒸馏水并稀释至1000ml。用pH计较正后使用。2、染色液:氨基黑10B0.5g,甲醇50ml,冰乙酸10ml,蒸馏水40ml混匀即可。3、漂洗液:95%乙醇45ml,冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。四、试验步骤1、准备:用镊子取薄膜一条,浸入缓冲液中,完全浸透后(大约3-5分钟),用镊子取出,将无光泽的一面向上,平放在干净滤纸上,将滤纸对折,吸取
3、多余的缓冲液(注意不要吸的太干)。2、点样:取盖玻片一块,用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上,直直的在薄膜一端1/3处点样。3、电泳:将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上,无光泽面要向下放置,点样端放在阴极,进行电泳。电泳条件:电压90-110V,电流0.4-0.6A,通电60分钟。4、染色:电泳完毕,将薄膜浸入染色液(回收)中10分钟,进行染色。5、漂洗:染色完毕,将薄膜取出,放入漂洗液中漂洗至背景无色,在浸入蒸馏水中。6、图谱观察:观察图谱,将各种血清蛋白质按实际比例大小绘于实验报告纸上。注意事项请带试验的老师试验结
4、束后,将镊子回收。醋酸纤维薄膜在光下面能明显区分有光泽面和无光泽面。电泳槽中间为正极,两端为负极。染色液请用完后回收到原来的试剂瓶中。漂洗薄膜时,请做到“少量多漂”,即用少量的漂洗液去漂洗薄膜,多漂几次,这样既不浪费漂洗液,还达到了漂洗的效果。实验十二维生素C的定量测定(2,6-二氯靛酚滴定法)一、原理维生素c又称为抗坏血酸,其还原型能还原染料2,6-二氯靛酚钠盐,本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中,2,6-二氯靛酚成红色,被还原后变为无色。因此可用2,6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C,当样品中的维生素C被完全还原后,在滴加过量
5、的2,6-二氯靛酚,溶液变为淡红色,即为终点。如无其他杂质干扰,则样品液所还原的2,6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C的量成正比。二、实验仪器新鲜水果吸管容量瓶滴定装置锥形瓶研钵漏斗三、实验试剂1、2%草酸溶液:草酸2g,溶于100ml蒸馏水。2、1%草酸溶液:草酸1g,溶于100ml蒸馏水。3、标准维生素C液:准确称取10.0mg维生素C,溶于1%草酸溶液,并稀释至100ml,贮于棕色瓶中,冷藏,最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.4、0.1%2,6-二氯靛酚溶液:称取500mg2,6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg
6、碳酸氢钠的热水中,冷却,加蒸馏水并稀释至500ml,滤去不溶物,贮于棕色瓶中,冷藏。四、实验步骤1.样品中抗坏血酸的提取:将水果用水洗干净,用滤纸吸取表面水分。称取2.0g,加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。直接将浆状物,倒入50ml容量瓶中,用2%草酸溶液稀释并定容,混匀,静止10分钟,过滤(最初数毫升滤液弃去),滤液备用。2.滴定1)标准液的滴定:准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml于100ml锥形瓶中,加9ml1%草酸溶液,用2,6-二氯靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。有所用2,6-二氯靛酚的体积算出1ml染料相当于
7、多少毫克抗坏血酸。2)样品液的滴定:准确吸取滤液两份,每份10ml,分别放入两个100ml锥形瓶中,滴定方法同上。(2,6-二氯靛酚用完后,请回收回原来的试剂瓶中)五、结果计算按下式计算100mg样品中含抗坏血酸的毫克数:m=V*T/W*100V=滴定时所用染料ml数T=每毫升染料氧化抗坏血酸质量W=10ml样液相当于含样品的质量数注意事项1、滴定过程宜迅速,一般不超过2min。2、滴定所用染料一般不应少于1ml或多于4ml,如果样品中含抗坏血酸太高或太低时,可酌量增减样液。3、研磨时要尽量研磨成浆状物。
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