食品中米酵菌酸的测定 标准文本.doc

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1、GBxxxx—xxxx食品安全国家标准食品中米酵菌酸的测定（征求意见稿）xxxx-xx-xx实施xxxx-xx-xx发布中华人民共和国卫生部发布1.1.1.1　2010-06-01实施2010-××-××发布GBxxxx—xxxx前言本标准代替GB/T5009.189-2003《银耳中米酵菌酸的测定》。本标准与GB/T5009.189-2003相比，主要变化如下：——修改了标准的中、英文名称；——修改了适用范围;——规定了测定方法顺序，高效液相色谱法为第一法，薄层色谱法为第二法；——修改了高效液相色谱法中的样品处理，增加了固相萃取；——增

2、加了高效液相色谱条件；——增加了方法的检出限和定量限；——增加了附录A。8GBxxxx—xxxx食品安全国家标准食品中米酵菌酸的测定1范围本标准规定了食品中米酵菌酸（bongkrekicacid）的测定方法。本标准适用于食品中米酵菌酸的测定。第一法高效液相色谱法2原理试样经提取、净化、浓缩及过滤后，经高效液相色谱仪（HPLC）分析，外标法定量。3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.2冰乙酸（CH3COOH）。3.1.3氨水（NH3·

3、H2O）。3.1.4甲酸（CH2O2）。3.1.5浓盐酸（HCl）。3.1.6磷酸（H3PO4）。3.1.7碳酸氢钠（NaHCO3）。3.1.8石油醚（C5H12O2）：沸程30℃～60℃。3.1.9无水乙醚（C4H10O）。3.1.10三氯甲烷（CHCl3）。3.2试剂配制3.2.145.4%磷酸溶液：量取45.4mL磷酸（3.1.6）于100mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度。3.2.240g/L碳酸氢钠水溶液：称取40g碳酸氢钠（3.1.7）于1000mL容量瓶中，加水溶解定容至刻度。3.2.36mol/L盐酸溶液：量取50mL浓盐酸

4、（3.1.5）于100mL容量瓶中，用水稀释定容至刻度。8GBxxxx—xxxx3.2.4甲醇-氨水溶液：量取80mL甲醇（3.1.1），加入1.0mL氨水（3.1.3），加水定容到100mL，混匀。3.2.52%甲酸-甲醇溶液：吸取2mL甲酸（3.1.4）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度。3.3材料固相萃取柱或等效品：阴离子交换柱(60mg/3mL)，临用前依次加5.0mL甲醇（3.1.1）和5.0mL水活化，保持柱体湿润。3.4标准品米酵菌酸（C28H38O7）标准品，纯度为95％。3.5标准溶液配制3.5.1米酵菌酸标准储

5、备液（0.1mg/mL）：准确称取米酵菌酸标准品1mg（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度。置于4℃冰箱中避光保存，有效期为6个月。3.5.2米酵菌酸标准标准曲线工作液：分别吸取米酵菌酸标准储备液（3.5.1）用甲醇稀释定容，配制成0.3μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL的标准工作溶液。临用时配制。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪，带二极管阵列检测器。4.2天平（感量为0.01mg）。4.3固相萃取装置。4

6、.4超声波振荡器。4.5旋转蒸发仪。4.6氮吹仪。4.7微孔有机滤膜（孔径0.45μm）。4.8涡旋混匀器。4.9恒温水浴锅5分析步骤5.1试样制备8GBxxxx—xxxx5.1.1固相萃取法5.1.1.1提取将干试样经粉碎过40目筛后，称取20g置于锥形瓶中，加入100mL甲醇-氨水溶液（3.2.4）；或将鲜、湿试样经剪碎、磨细及混匀后称取10g，加入80mL甲醇-氨水溶液（3.2.4）；混匀，于室温中避光浸泡1h，置于超声波振荡器（4.4）中超声提取约30min，过滤，干试样取滤液50mL,鲜、湿试样取滤液40mL，置于80℃水浴中浓

7、缩至约3mL，待净化。5.1.1.2净化将浓缩后的试样全部转移到活化过的固相萃取柱中，依次用5mL水和5mL甲醇淋洗，弃去流出液，真空泵抽干5min，再用6mL2%甲酸甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴中氮吹至干，加入0.5mL甲醇，涡旋溶解，混匀，经微孔有机滤膜（4.7）过滤后进行HPLC分析。5.1.2液-液萃取法将干试样经粉碎过40目筛后，称取20g，置于具塞锥形瓶中，加入20mL甲醇（3.1.1）,于室温中避光浸泡1h，然后再加入80mL三氯甲烷（3.1.10）和0.2mL45.4%磷酸溶液（3.2.1）；鲜（湿）试样经剪碎、

8、磨细及混匀后称取10g，加入16mL甲醇，于室温中避光浸泡1h，再加入64mL三氯甲烷和0.16mL45.4%磷酸溶液。振荡30min，过滤，干试样取滤液50mL，鲜、湿试样取滤液40mL。将