微生物学实验目的与要求.doc

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1、实验五病原性球菌目的(一)掌握致病性葡萄球菌的特征；抗链球菌溶血素“O”试验；甲型链球菌与肺炎链球菌区别。(二)熟悉三种链球菌在血平板上的区分；肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌的形态特征。(三)了解病原性球菌的形态、染色性。内容(一)病原性球菌的形态及染色性(示教)。(二)葡萄球菌培养及生化特性(示教)。(三)致病性葡萄球菌的鉴定(操作)。(四)链球菌的培养与抗链球菌溶血素“O”试验(示教与操作)。(五)肺炎链球菌与甲型链球菌的区别(示教)。(六)脓汁或咽拭子分离培养(操作)。一、病原性球菌的形态及染色性(示教)1．葡萄球菌的形态及染色性(示教)【材料】金黄色葡萄球菌革兰染

2、色示教片。【方法】油镜观察细菌的形态、排列及染色性。2．链球菌的形态及染色性(示教)【材料】乙型链球菌血清肉汤培养物制作的革兰染色示教片。【方法】油镜观察链球菌的形态、大小、排列及染色性。3．肺炎链球菌的形态结构及染色性(示教)【材料】肺炎链球菌革兰染色示教片、肺炎链球菌荚膜示教片。【方法】油镜观察二张示教片中肺炎链球菌的形态结构特点及其染色性。4．脑膜炎奈瑟菌的形态及染色性(示教)【材料】5脑膜炎奈瑟菌革兰染色示教片。【方法】油镜观察注意形态、大小、排列以及染色性。5．淋病奈瑟菌的形态及染色性．【材料】淋病性尿道、阴道脓汁涂片（革兰染色）。【方法】油镜观察细菌形态

3、、排列、在细胞内或外及染色性。二、葡萄球菌培养及生化特性(示教)【材料】1．金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌血琼脂平板培养物2．金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌甘露醇管【方法】1．取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的血琼脂平板培养物，观察二种葡萄球菌单个菌落的形态、大小、表面、边缘、透明度、颜色及溶血性(如颜色不易区别时，可用滤纸片揩抹菌落观察)。2．取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的甘露醇发酵管，观察二者对甘露醇的分解情况。三、致病性葡萄球菌的鉴定致病性葡萄球菌的鉴定，一般实验室都根据以下特征，其中尤以血浆凝固酶试验意义最大。1．产生金黄色色素。2．对家兔或羊红细胞有溶血作用。

4、3．分解甘露醇，产酸不产气。4．血浆凝固酶试验阳性。5．耐热DNA酶试验阳性。血浆疑固酶试验：试管法(示教)【材料】见实验四。【方法】见实验四耐热DNA酶试验(示教)5【原理】致病性葡萄球菌能产生DNA酶，它可特异地分解DNA的磷酸戊糖联结的磷酸二酯键；且有明显耐热性，经180℃15分钟或60℃2小时也不灭活。此酶最适pH9.0，在含DNA基质的琼脂一Tris缓冲液中(PH9.0)，随DNA被分解指示剂甲苯胺蓝从蓝色变粉红色。【材料】经100℃煮沸15分钟后的金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌24小时液体培养物；甲苯胺蓝-DNA-琼脂(PH9.0)。【方法】1．取装有3m

5、l甲苯胺蓝-DNA-琼脂培养基的小试管置沸水浴中溶化，浇小玻片一块(琼脂全部用完)，待琼脂冷却凝固后，以3mm直径打孔器打2个孔。2．用无菌滴管吸取加热冷却后的金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌菌液，加人不同的小孔中，置37℃培养2~3小时后观察结果。3．凡小孔周围出现透明粉红色小圈者为阳性，小孔周围仍为蓝色不透明者为阴性。注：指示剂甲苯胺蓝在酸性中呈红色，在中性或弱碱性溶液中呈蓝色。四、链球菌的培养与抗链球菌溶血素“O”试验(一)培养特性(示教)【材料】甲、乙、丙三型链球菌血琼脂平板及乙型链球菌10％兔血清肉汤培养物。【方法】1．观察三种链球菌在血琼脂平板上的菌落形态，

6、注意其大小、表面、透明度及溶血情况。2．观察链球菌在10％兔血清肉汤中生长情况(混浊、沉淀、表面生长)。(二)抗链球菌溶血素“O”(ASO)试验(操作)【原理】链球菌侵人体内可释放溶血素“O”(SO)，它刺激机体产生相应抗体(ASO)。试验时先以溶血素“O”与病人血清混匀产生中和反应，再加入SO乳胶试剂，若病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗体则与乳胶试剂反应，产生清晰凝集，是为阳性；反之为阴性，故本试验属体外中和反应，观察到的现象为间接凝集。【材料】8单位/毫升链球菌溶血素“O”，l:15病人血清，链球菌溶血素“O”乳胶试剂，黑底玻片，滴管，对照（正常）血清。【

7、方法】51．取已稀释的病人血清与正常血清各一滴，分别滴于玻片的两侧，然后于两侧各加一滴8单位/毫升链球菌溶血素“O”，晃摇或用牙签混匀2分钟，使其充分混匀。2．于上述混合液中各加一滴乳胶试剂，晃摇或用牙签混匀3分钟，使其充分混匀。3．立即观察结果：(1)有清晰凝集者为阳性，血清滴度>500单位/毫升。(2)无凝集者为阴性。“注”：若需进一步测定其血清滴度，用生理盐水将阳性血清再作对倍稀释，再按第2项进行实验，若仍呈清晰凝集时，则血清滴度>800单位/毫升。五、肺炎链球菌与甲型链球菌的区别(示教)(一)培养特性(示教)【材料】肺炎链球菌及甲型链球菌血琼脂平板培养物