不同实验中transwell小室的选择和使用.doc

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1、不同实验中transwell小室的选择和使用Transwell小室在细胞实验中很常用，共培养实验、趋化实验、细胞迁移、细胞侵袭以及药物转运实验都会用到，但小室的规格有很多种，不同的实验需要用到的小室规格也不同。根据transwell板的不同，transwell小室可以分为6孔板小室、12孔板小室和24孔板小室以及和transwell皿配套的75mm直径的小室；根据孔径的不同，从小孔径到大孔径又分为0.4μm规格、3μm规格、5μm规格、8μm规格，不同实验对小室孔径的要求也不一样。 小于3μm孔径的小室，细胞不会迁移通过，研究不涉及细胞运动能力，

2、不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，应该选择3μm以下的孔径。例如共培养实验和caco-2细胞转运模型实验。共培养实验：常用0.4、34μm，将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。 caco-2细胞转运模型：选用0.44μm膜，将Caco-2细胞以约l×10个/mL，每孔0.5mL的密度接种在Transwell内培养21d左右，前1周隔天换液，1周后每天换液。在模型建立的同时对其跨膜电阻值及碱性磷酸酶活性进行监测来判断模型是否达到转运实验要求。 涉及到细胞迁移的实验：要用5.0、8.0、12.0μm的小室，这样

3、上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映细胞的趋化能力、迁移能力和侵袭能力。 趋化性实验：细胞B对细胞A的趋化作用，将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用；趋化因子对细胞的趋化作用，将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。 细胞迁移实验：常用8.0、12.0μm膜，上室种细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映细胞的迁移能力。 细胞侵袭实验：常用8.0、12.0μm膜，原理与细胞迁移实验类似。

4、上室种细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，细胞会向营养成分高的下室跑，但与细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映细胞的侵袭能力。