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《人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定医学论文.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定作者：秦明春，王若光，秦莉花，刘小丽，李春梅，刘惠萍，叶赞【摘要】目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法，提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型，为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带（至少20cm）冲净淤血，采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液，一根用0.2%胶原酶U,另一根用0.1%胶原酶I和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10ng/mL的VEGF的培养基中培养，观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点，同时用免疫组织化学的方法
2、对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞，胶原酶U的消化效果稍优于混合消化酶，且比较理想的消化时间均为13min,细胞接种后4〜5h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层，光镜下呈多角形，“铺路石”样排列，免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第VDI因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶II和胶原酶I与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法，而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液，成功率高，可靠性大，可成功构建体外研究血管内皮细胞的
3、模型。【关键词】人脐静脉内皮细胞；细胞培养；流式细胞术；细胞周期；分离；鉴定Cultivationandinvitroidentificationofendothelialcellsfromhumanumbilicalvein人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定作者：秦明春，王若光，秦莉花，刘小丽，李春梅，刘惠萍，叶赞【摘要】目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法，提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型，为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带（至少20cm）冲净淤血，采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液，一根用0.2%胶
4、原酶U,另一根用0.1%胶原酶I和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10ng/mL的VEGF的培养基中培养，观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点，同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞，胶原酶U的消化效果稍优于混合消化酶，且比较理想的消化时间均为13min,细胞接种后4〜5h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层，光镜下呈多角形，“铺路石”样排列，免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第VDI因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期
5、显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶II和胶原酶I与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法，而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液，成功率高，可靠性大，可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。【关键词】人脐静脉内皮细胞；细胞培养；流式细胞术；细胞周期；分离；鉴定Cultivationandinvitroidentificationofendothelialcellsfromhumanumbilicalvein[Abstract〕ObjectiveToexploretheprimaryculturemethodofh
6、umanvascularendothelialcells(ECs)fromumbilicalvein,enhancethesuccessrateofseparatingandculturingECsinvitro,establishthemodelofhumanvascularECs,andprovideanexperimentalmethodforresearchofECs・MethodsTheumbilicalveinsinhumanumbilicalcords,20cmlong,werefixedandfilledthedigestivefluid
7、s,0.2%collagenenasellinonecordandthecomplexenzymeof0.25%trypsinand0.1%collagenaseIinanother,andthedigestiveresultswerecompared・Allthecellswerecollectedandculturedinfluidwith10mg/mLVEGF,theirprocreationandgenerationwereobserved,themorphologiccharacteristicsofECswereobservedwithlig
8、htmicroscopyandimmunohistochemistryunder
