猪脐静脉血管内皮细胞体外培养研究

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3、，：一一‘＇Ｎｒ＾ｏ－為＇－蠢＇户；＇人Ｖ－护．．ＪＷ分类号密级ＵＤＣ单位代码剛南农巫夫＃硕：ｔ学位论文猪月齐静脉血管内皮细胞体外培养研究Ｔｈｅｓｔｕｄｏｆｃｕｌｔｕｒｉｎｓｗｉｎｅｕｍｂｉｌｉｃａｌｙｇｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ研究生姓名谢杨指导教师薛立群教授学科专业临床兽医学研究方向动物生殖医学论文答辩日期２０１５年６月４日答辩委员会主席李文平论文评阅人袁慧、李剑波、邱美珍二０—五年六月独创性声明本人声明所

4、呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：兵月化关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，可Ｗ采用影印、缩印或，允许论文被查阅和借阅扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ

5、用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）三７研究生签名：ｋ时间：年＾月－导师签名＾口：时间：２年／＾月｜１０妻為］、摘要摘要目的；对猪厮静脉血管内皮细胞进行体外培养并使其永生化，进而为研究过氧化物酶体増殖物激活受体ＰＰＡＲｙ对猪胎盘及胎盘血管发生的影响提供良好的细胞模型。：采用胶原酶对新鲜仔猪脉静脉血管内皮细施进行消化分离方法，获得原代细胞并在Ｃ化培养箱条件下进行体外培养；显微镜观察细胞生长的形态学变化，免疫组化法进行细胞鉴定；利用ＩＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ细胞功能

6、分析仪监测体外培养细胞的生长曲线变化，并采用流式细胞术检测细胞周期和调亡；采用端粒酶转入的方法进行体外培养猪厮静脉血管内皮细胞的永生化处理，并用Ｇ４１８药物筛选阳性单克隆细胞；利用细胞功能分析仪监测激动剂和抑制剂对该细胞増殖能力的影响。结果：（１）原代细胞生长状态良好，呈小Ｈ角形、楠圆形、梭形、多边形单层生长，界限清晰，融合后呈铺路石状排列，细胞増殖能力强。多次传代后细胞增殖能力减弱，细胞活为差，洞亡细胞增多。兔抗人第八因子相关抗原ＦＷＡｇ（）抗体和兔抗人ＣＤ３１多克隆抗体鉴定均呈阳性。（２）原代细胞转入端粒酶后，转染效检证明端粒酶成

7、功转入细胞内；转染细胞药筛１４ｄ后获得单克隆细胞，并能够增殖传代，细胞状态良好。（３）当激动剂浓度为时，可Ｗ促进ＰＰＡＲｙ蛋白的表么加速原２０＿ｏｌ／ｍｌ代细胞和单克隆细胞的生长増殖，増强细胞活为当抑制剂浓度为ｉＭ；｜时，，明显抑制ＰＰＡＲｙ蛋白的表达，从而抑制细胞的生长増殖降低细胞活力。结论，经：本研究由巧厮静脉血管分离获得的原代培养细胞体外培养观察和细胞特征性标志物检测，符合血管内皮细胞的基本特征；原代培养细胞经端粒酶，并表现出良好的生长增殖能力转染和药筛处理获得转染阳性单克隆细胞；使用ＰＰＡＲｙ激动剂