人脐静脉内皮细胞体外分离培养方法改进的探索及鉴定

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1、人脐静脉内皮细胞体外分离培养方法改进的探索及鉴定AnImprovedMethodofCulturingHumanUmbilicalVeinEndothelialCellsanditsCharacterizati0n林少芬周焕娇丁运刚梁小玲罗燕唐仕波中山大学眼科学国家重点实验室中山大学中山眼科中心，广州510060ShaofenLin，HuanjiaoZhao，YungangDing，XiaolingLiang，YanLuo，ShiboTangStateKeyLaboratoryofOphthalmology，ZhongshanOphthalmicCenter

2、，SunYat—senUniversity，Guangzhou510060，China目的：建立能大量分离人脐静脉内皮细胞的体外培养的简便方法，分析人脐静脉内皮细胞抗原表达的特点。方法：采用玻璃接管连接医用三通管灌注0．133％胶原酶I法分离脐静脉内皮细胞，培养于10％胎牛血清的人内皮细胞培养液(含B一促内皮细胞生长因子和肝素钠)，培养皿用1．5％明胶包被，促进内皮细胞贴壁。培养过程中观察细胞的形态特征，同时行免疫组织化学染色检测第八因子相关抗原、CD31表达情况，鉴定内皮细胞来源。结果：成功获取人脐静脉内皮细胞，原代人脐内皮细胞24h贴壁，第5日细胞融合；

3、第八因子相关抗原和CD31呈广泛的阳性表达，第八因子相关抗原阳性染色程度高于CD31，证实为人脐静脉内皮细胞。结论：应用玻璃接管连接医用三通管灌注胶原酶消化法分离脐静脉内皮细胞，利用10％优质胎牛血清的人内皮细胞培养基，添加B一促内皮细胞生长因子和肝素钠，并用1．5％明胶包被培养皿。能简单有效培养人脐静脉内皮细胞。腠学援2010；2599—102．关键词：人脐静脉内皮细胞、细胞培养方法、鉴定Purpose：T0establishasimpleandconvenientmethodforthecultureofhumanumbil．icalveinendoth

4、elialcells(HUVECs)andstudyitscharacterizationinvitro．Methods：HumanumbilicalcordwasisolatedanddigestedbycollagenasetypeI．Andthen．itwasculturedin1．5％gehaincoateddishwith10％fetalbovineserum(FBS)，heparinsodiumandp—endothelialcellgrowthfactor(p-ECGF)inhumanendothelialbasalgrowthmedium．H

5、UVECswereidentifiedbyanti．humanfactorⅧrelatedantigenandCD31immunohistochemicalstaining．Results：WecansuccessfullycultureHUVECsinthisway．HUVECsattachedthedishin24hoursandtheconfluencewasseenin5days．HUVECsweregenerallypositiveforanti．humanfactorⅧrelatedantigenandCD31．Conclusion：ItiSaf

6、astandeffectivemethodtoculturepurifiedHUVECssuccessfullyinwhichweusecollagenasetypeItodigestHUVECswithglasstubeconnectedtoT—tube．humanendothelialbasalgrowthmediumcontaining10％FBSandhepafinsodi．amandB—ECGFin1．5％gehaincoateddish．EyeScience2D；25：99一J．Keywords：HumanUmbilicalVeinEndothe

7、lialCells；Culture；Identification眼科学报2010年第25卷第2期关闭三通管。置超净工作台内室温18min．消化期体会墓间可转动血管壁，让消化酶、血管充分作用。松开机制研究的重要途径之一。目前对培养人脐静脉止血钳，将含有细胞的酶消化溶液收集到烧杯，用内皮细胞的实验方法存在差异。本实验通过改良20％胎牛血清DMEM／F12冲洗脐静脉．并中止消传统的培养方法，建立了简单有效的分离培养方化，转移至无菌烧杯，置入离心管，1500r／rain离法，同时检测了不同内皮细胞抗原表达情况，现报心7min，弃上清液。加人含内皮细胞生长因子的告如下

8、。内皮细胞培养液．吹打均匀．移人含1．5％明胶包被的