(自改)酶的竞争性抑制作用.ppt

《(自改)酶的竞争性抑制作用.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用P、97生物化学与分子生物学实验CQMU丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用目的：P、97原理：1、概念：丙二酸（I）与琥珀酸（S）结构相似，竞争结合琥珀酸脱氢酶活性中心，抑制酶活性。2、竞争性抑制特点：P、98①Vm不变，Km↑；②E的抑制程度∝[I]/[S]；③[S]足够大，抑制解除。3、观察：操作：1、酶提取液的制备2、取试管6支，按表所列步骤操作。3、实验结果及分析注意事项：一、实验目的学习和掌握酶竞争性抑制的概念和特点观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用二、实验原理抑制剂和底物的结构相似，可与底物竞争酶的活性中心，阻碍酶-底物复合物的形成。酶

2、的竞争性抑制作用抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力以及抑制剂与底物浓度的相对比例（[I]/[S]）●Km和Vmax的求法底物浓度曲线是双曲线。●竞争性抑制的动力学以1/V对1/[S]作图HOOC—CH2—CH2—COOHHOOC—CH=CH—COOHFADFADH2MBH2甲烯白（无色）MB甲烯蓝（蓝色）在无氧条件下，以甲烯蓝褪色时间来判断琥珀酸脱氢酶活性的改变。丙二酸HOOC—CH2—COOH琥珀酸脱氢酶酶活性则甲烯蓝褪色时间高低较短延长—三、实验步骤1.酶提取液的制备处死大白鼠，取出肝、肾、心。制备匀浆液。２.酶促反应及竞争性抑制作用取试管6支，按表所列步骤操作。加液体石蜡以隔绝空气，

3、37℃水浴保温。随时观察各管，记录褪色所需时间。3.结果及分析酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？各管的褪色情况有何区别？为什么？丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型及其特点是什么？本实验中5号、6号试管的作用是什么？完全褪色所需时间计算各管[I]/[S]654321试管编号各管均在最后加入琥珀酸。并且立即混匀，沿管壁加入石蜡油约0.5cm厚，37℃水浴保温（不摇动）。随时观察记录褪色所需时间P.99四、注意事项加试剂时看清底物与抑制剂的浓度。注意随时观察各管褪色情况。37℃水浴保温过程中，不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。实验结束后，一定要洗净试管内的液体石蜡。Let'sbegin！