实验七、血液葡萄糖的测定.ppt

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1、实验六血液葡萄糖的测定（福林-吴宪氏法）一、实验目的1、掌握采用福林-吴宪氏法测定血液中葡萄糖的原理。2、熟悉分光光度计的使用。二、实验原理磷钼酸钼蓝（蓝色）C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5COOH+Cu2O↓3Cu2O+3H3PO4·2MoO3·12H2O6CuO+3H3PO4·Mo2O3·12H2ONa2CO3＋H2O＝NaOH+NaHCO3NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4碱性铜试剂钼蓝溶液显蓝色，其蓝色的深浅与血滤液中葡萄糖的浓度成正比，选用颜色深浅较接近于测定管的标准管一同比色，即可求出测定管中葡萄糖的含量。血糖管的使用

2、：血糖管下部的管径较细，以避免还原生成的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。三、实验步骤1、全血无蛋白滤液的制备抗凝血1ml蒸馏水7ml混匀1/3mol/L硫酸1ml振摇10%钨酸纳1ml振摇过滤放置5min无蛋白血滤液2、按表操作混匀，置沸水浴中煮8min。取出用流动自来水冷却3min无蛋白血滤液蒸馏水标准葡萄糖应用液碱性铜试剂空白管标准管测定管1.02.01.01.0---1.0-2.02.02.0血糖管试剂ml磷钼酸试剂2.02.02.01：4磷钼酸溶液加至混匀后放置2min12.512.512.53、比色测定将各管颠倒混匀后，用空白管调零，在42

3、0nm处测定吸收度。四、操作注意1、等水沸腾后，才能放入血糖管。加热要准确8分钟。2、冷却时切不可摇动血糖管，以免还原的氧化亚铜被空气中的氧再氧化，降低实际结果。3、加入磷钼酸后迅速比色。4、分光光度计的使用。分光光度计的使用1、接通电源，打开比色皿盖，预热20-30分钟后，调节波长至所需波长。2、将盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其余放测定溶液。将比色皿盖盖上，此时空白溶液在光路上。将光点调到“T”，调节T为100%。3、将光点调到“A”，轻轻拉动比色架固定拉杆，使第二个比色皿溶液处在光路中，此时读数即为该溶液的吸收度。4、依次拉出第三、第四个比色皿

4、，分别读取吸收度。5、测定完毕，先打开比色皿盖，再断电源。五、结果计算测定管吸收度标准管吸收度葡萄糖mg/100ml=×0.1×1000.1六、分析讨论