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《磁珠法快速提取鉴定DNA的实验研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、生物学通报】拓年第卷第期磁珠法快速提取鉴定的实验研究’’’’王平康骆延王光志程玉泉骆力河南科技大学河南洛阳洛阳绿谷科技有限公司河南洛阳。、摘要探索用磁珠法进行动植物的快速提取与电泳鉴定实验操作简捷直观降低了实验成本,,以在、、提升了实验水平使得高纯度的提取实验今后可大学生中学生的生物学遗传学实,、。验室进行给更多的学生和教师科研人员参与生命科学的研究提供了机会关健词磁珠提取鉴定琼脂糖电泳磁珠是一种包被有生物活性基团的功能化载体,可检材准备提前准备,供全班使用。取市分散于基液中形成磁性液体材料,它兼有液体的流动性售香菜
2、叶一,在研钵内稍加研磨,成粗丝状即可,和固,一。一,体磁性颗粒材料的双重特点从而使固液相的分时间约然后加人细胞裂解液用干净玻离变得十分方便快捷。磁珠法特异性地把分离技,放人水浴箱中的隔板上,恒温,璃棒搅匀℃时间,。。术和富集技术有机的结合为一体通过简单的洗脱即可每隔用玻璃棒搅匀取出后放凉以得到纯度很高的靶物质。磁珠法的出现和应用,,再慢慢吸取上清约转移至的试剂瓶,。。给生命科学的研究提供了一种新式的手段和武器也给中备用实验时每个小组吸取上清即可若单独大、中学生对的直观认识提供了一个简捷、客观的作实验时,取香菜叶或血液
3、直接加人。一。实验途径裂解液仿此操作即可,,,材料和设备水浴箱准备实验前开启恒温℃检材香菜叶、芹菜叶、洋葱花菜、白色花瓣、各里面放人多孔或网状隔板,与水面相平。、、、、,种花蕊干燥野菊花玉米大豆胚胎人类抗电泳缓冲液准备取电泳缓冲液母液加,,。,,。凝全血可任选一种优选使用花蕊和菜叶蒸馏水至即成电泳缓冲液使用液够全班使用注不推荐使用鸡血,因禽流感等动物病毒较多,琼脂糖凝胶板制作准确称取电泳级琼脂所,,,,以一般情况下学生实验尽量不使用血液制品若必糖放人的三角烧瓶中加蒸馏水巧水浴须实验,建议到医院化验室或血站联系购置无传
4、染病℃,时间约,使琼脂糖彻底溶解成无色透明的毒的纯净血液。猫稠溶液,取出后,加入荧光染料液林,搅匀,缓缓,,,,,,试剂细胞裂解液磁珠悬液洗涤液洗脱液倾人到个插有孔梳子的制板盒中胶液面与盒上缘,,。。,,可电泳缓冲液母液电泳指示液荧光染料液相平约后胶液完全凝固再慢慢拔出梳子看到,,,,、、、、、,设备微量移液器吸头磁架离心管清晰完整的个上样胶孔依次为泳道,,,,,。管电泳槽凝胶盒直流电源紫外线灯每小组占用个泳道第泳道作为空白阴性对照箱,水浴箱,试管架,烧杯,孔塑料点滴板。块凝胶板可供全班个电泳大组使用。实验原理提取操
5、作步骤,,。磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂可使动现以植物叶提取为例其他检材仿此操作,,植物的细胞膜裂解并使与结合的蛋白质变性加人磁珠在微量离心管管中加人,,林,游离释放磁珠可以特异性地吸附通过洗预先准备好的香菜叶上清液再加人摇,、,林,,,。涤去除以外的蛋白质等杂质再用洗脱液匀的磁珠悬液盖紧上盖颠倒混匀放置而解离吸附在磁珠上的,得到纯度和浓度均很高的磁分离把管放到磁架上,静置半分钟,磁,可用于模板、基因工程等。珠自动被吸附在管壁上,吸弃上清,磁分离操作要在,,以。琼脂糖是一种链状多糖其载样凝胶在缓冲液中磁架上完
6、成避免吸掉磁珠接通直流电源的情况下,带负电荷的分子可通洗涤从磁架上取下管,加人洗涤液,,吸,,。过琼脂糖凝胶中的网孔从负极向正极泳动由于荧光使磁珠与洗涤液混合均匀磁分离吸弃上清,,开,,染料分子可插入分子的个碱基之间在紫外重复洗涤一次盖放置使磁珠干燥管内及。。线的照射下可呈现出桔红色的荧光管盖上残液要抽净实验前准备洗脱加人洗脱液林,抽吸混匀,盖,,,℃,分组设计若全班个学生人为一实验小紧上盖插人到水浴箱隔板上温育而取出组,共小组,人中人主管操作,人监督提示。管后立即放到磁架上,吸取上清至新的管每小组编为个电泳大组。中
7、,供作电泳鉴定用。叉年第卷第期生物学通报,。一电泳鉴定操作步骤道为牡丹花蕊浓度为卜比值为值一值,均在左右,说明磁珠法提取的纯指示液点样每个电泳大组领取预先准备好的度。,,和浓度都很高琼脂糖凝胶连同胶框块水平放置在桌面上另取,,磁珠法提取人类全血电泳图及紫外分光孔塑料点滴板块吸取蓝色的电泳指示液林在点,,光度计检测结果滴板孔中点成个小圆点共个圆点每个圆点供。个小组使用上样仔细吸取洗脱液卜,小心加到蓝色圆点上,慢慢抽吸次混匀,准确地注入到胶块上的小孔内,每个小孔代表个泳道,第泳道为空白阴性对照换用新吸头吸取林蒸馏水替代洗
8、脱液。泳道排列顺序从胶块切角端算起,分别作为图磁珠法提取人类全血电泳图、、、、、,。泳道各小组要记清楚自己的泳道裹全血紫外分光光度计检测结果,上样电泳把胶块放到电泳槽中间的托板上孔一编号比值浓度一端朝向电源的负极端,再向电泳槽中倾人电泳缓冲液,。使用液使液面刚好浸没胶块为准开启电泳仪电源开,关,控制电压一,电流一,电泳时间,,。电泳仪有路输出可
