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时间：2020-01-11
《动物细胞的原代培养.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、动物细胞的原代培养－－组织块法无菌室下风口上风口液氮罐安全柜着装操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手，然后用1‰新洁尔灭浸泡消毒5分钟将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1‰新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪，剪碎组织接种组织块移入培养箱中（注意贴有组织块的一面朝上），静止2～3小时，然后将细胞培养瓶轻轻翻转，继续静止培养。观察24～48小时后若培养液变成黄色且混浊，表示已被污染；若培养液变成紫色，一般细胞生长不好，则培养液pH过高；若培养液显为橙黄、橘红
2、且清澈，一般显示细胞生长良好。在相差显微镜下观察，若此时见细胞自组织边缘长出。继续培养3～5日，再换部分或全部培养液，待多数组织块的生长晕相接，小心挑掉组织块，继续培养3～4天，细胞贴满细胞培养瓶壁时便可进行传代培养。骨髓瘤细胞的培养骨髓瘤细胞消化数分钟中止消化、吹散细胞收集细胞、离心计数细胞传代37℃、5％CO2培养小鼠的免疫实验市售绵羊血血球计数板计数，调整细胞浓度抓小鼠的方法腹腔注射免疫尾静脉免疫皮下免疫足垫免疫脾脏免疫－1所需器具称重脾脏免疫－2注射麻药脾脏免疫－3打结固定小鼠脾脏免疫－4酒精消毒去毛碘酒消毒脾脏免疫－5剪开外皮剪开腹
3、膜找到脾脏脾脏免疫－6注射抗原脾脏免疫－7注射双抗缝合伤口每隔15天重复注射作加强免疫，共重复2次第三次免疫之后10天，将小鼠断尾取血，用ELISA方法，检测血清效价。取脾细胞融合前3天加强免疫一次，以活化B淋巴细胞TheEnd
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