免疫定性试验的室内质量控制.pdf

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1、免疫定性试验的室内质量控制浙江省人民医院检验中心陈永健免疫定性试验免疫定性试验：只有两种检测结果（例如：阳性/阴性、存在/不存在、有反应的/无反应的）的方法。半定量免疫试验：结果报告为阴性、+1、+2、+3或滴度（1:8等）的方法（例如抗核抗体（ANA）滴度报告、梅毒快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）检测等）。中华人民共和国卫生行业标准临床定性免疫检验重要常规项目分析质量控制指标（征求意见稿）2012-2-8免疫定性试验（胶体金）免疫层析试验（ICA）免疫渗滤试验（IFA）传染性标志物（HBV、HI

2、V）激素（HCG、LH）心损标志物（cTNI、CKMB）金标免疫层析试验的室内质量控制质控区质控区质控区/对照区是室内质控？HCG金标试纸检测原理你在，或者不在，我都在这里。质控区呈色，反映了检测过程的无失误，但不能完全说明灵敏度有无变化，即不能用“质控线”来代替对试纸条质量的评价。HBsAg批批检？免疫定性试验如凝集试验、金标记免疫层析试验大都属于CLIA’88豁免的技术。FDA等批准家庭使用的技术，只要求检测装置有内对照，检测结果满足说明书规定即可。对于需要经验来判定结果的技术仍需在实验室进行，均

3、有质控的要求，但国际上无具体操作的规定和资料。美国CDC在“CLIA”88豁免的HIV抗体快速检测质量保证指南<2007年版>中要求：除检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性外对照作为质控。无判定标准，一般理解为阴、阳性质控的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控，相反则为失控。金标记免疫层析试验的猜想质控物：阴性和弱阳性外对照质控频度：检测日或分析批为单位质控判断：阴、阳性质控物的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控。免疫定性试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（enzyme-linke

4、dimmunosorbentassay）夹心法/竞争法/间接法/捕获法包被封闭加样温育洗涤加底物呈色终止反应判读结果（酶结合物）ELISA的室内质量控制〖临床ELISA操作中的注意事项和质量控制〗尽量控制可控因素：加样量、温育温度、洗涤次数/洗涤量、酶标仪等。减少不可控因素引起的误差：酶标板质量、温育时间等。加样量的差异温育时间的不可控公平竞争同时加入待测样本和酶标抗体温育时间的不可控HBcAb不公平竞争10分05秒加酶结合物后37℃温育25分ELISA室内质控品选择（个数）阴、阳对

5、照是内对照，用来保证实验有效和计算临界值，室内质控必须引入外对照（外部质控物）。ELISA定性试验的临床意义在于是给出阴性或阳性，与检出量无关，因此质量控制的重点是保证试验的灵敏度和重复性。质控品选择：阴性质控品/临界值质控/弱阳性质控品/阳性质控品/强阳性质控品（HOOK效应）。室内质控物自行配制ELISA室内质控品选择（浓度）质控品选择：阴性质控品/弱阳性质控品阴性质控品：自配或商品化弱阳性质控品：浓度？S/Co:1.5～4.0或2.0～4.0S/Co:1.5～4.0或2.0～4.0理论上可选

6、择这样的质控品，其S/CO值的均值-3SD时等于或略高于“判断值”，以保证用这一浓度质控品时，有99.7%的把握无阴性发生的可能。S/Co:1.5～4.0或2.0～4.0批间CV与浓度关系：批间CV的大小决定弱阳性质控物浓度的选择。CVS/CO临界值质控不同浓度HBsAb(S/CO)的批内变异CVS/CO35.030.025.0)20.0%S/CO(VCCV（%）15.010.05.00.0S/CO浓度1浓度2浓度3浓度42014年04月HBsAg室内质控原始数据（批间变异）OC/S2014-04HBsAg原

7、始数据3.503.002.502.001.501.000.500.0015913172125293337414549次OC/S2014-04HBsAg原始数据3.503.0035.02.5030.02.0025.01.50)20.0%S/CO1.00(VCCV（%）15.00.5010.00.0015913172125293337414549次5.00.0S/CO浓度1浓度2浓度3浓度4浓度选择需要实验摸索质控表征值OD值、S/N值、S/CO值、COindex值等阴性对照对实验结果的影响HBsAg：［阴性

8、］*2.1HBsAb：［阴性］*2.1N值＞0.1无效HBeAg：［阴性］*2.1HBeAb：［阴性］*0.2N值≤0.4无效HBcAb：［阴性］*0.5HBsAg阴性对照＞0.1阴性对照引起的质控变化HBcAbN值＞0.4有效OD值相近，但S/CO值差异大OD值：单变量S/CO值：双变量/三变量增加阴性对照的个数来保证质量。阴性对照均值（NCx）HIV实验：3个NC