从全血中抽提白细胞.pdf

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1、从全血中分离白细胞操作过程：1．用抗凝管收集全血，抗凝管需EDTA材质或者柠檬酸钠材质，不能用肝素钠材质。2．全血白细胞分离：下列以3ml抗凝血为例说明。a．向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血，而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖，温柔的颠倒混匀数下。请不要剧烈振荡。b．将离心管至于室温放置10min（5-10min，不要超过10min）。c．将离心管以2500转离心5min。d．弃上清，尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色班块细胞。e．弃去上清后在管底出现可见的白色班块，此白色班块为富集的白细胞。如果裂解不完全（白色班块里还有红色细胞），加入1mlPBS缓冲液重悬，然

2、后重复a－d步骤。f．充分裂解后，可用1mlPBS缓冲液清洗一次，2500转离心5min。g．弃上清，可获得血液样品中全部白细胞的80％以上。而后可加入适量Trizol（根6据细胞数量而定5X10加1mlTrizol）后，用移液器充分吹打，混匀，直至出现清亮不粘稠的液体，表示细胞充分裂解。h．而后可以把以上的Trizol试剂保存在生物冰中-70℃，最后用干冰运输寄于我们。