LC-MS-理论.pdf

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1、液相色谱液相色谱液相色谱液相色谱----质谱联用技术质谱联用技术质谱联用技术质谱联用技术及其在中药分析中的应用及其在中药分析中的应用及其在中药分析中的应用及其在中药分析中的应用熊爱珍上海中医药大学中药研究所教育部中药标准化重点实验室液液相色谱相色谱--质质谱谱联用技术联用技术一、一、液质联用概况液质联用概况二、二、液质联用接口技术液质联用接口技术三、三、液质联用质量分析器液质联用质量分析器四、四、液质联用分析方法的开发液质联用分析方法的开发一、液质联用概况一、液质联用概况一、液质联用概况一、液质联用概况液相色谱液相色谱--质谱联

2、用（质谱联用（LC-MSLC-MS））液相色谱质谱LiquidChromatographyMassSpectrometry分离系统检测系统3液质联用中的液相色谱�HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)高效液相色谱�UltraPerformanceLiquidChromatography(UPLC)超高效液相色谱�液质联用的前提和基础=进样+分离�根据化合物的化学特性分离样品(比如极性化合物，非极性化合物，酸性化合物，碱性化合物等等)�LC的特点:�分离效率高�流动相参与分离�连续流出，

3、峰宽有限�有时需要使用缓冲盐提高分离度�高压环境工作（>1000psi）poundspersquareinch；1psi=0.0689bar=0.068atm液质联用中的质谱�MassSpectrometry质谱�质量(质量数=质子+中子)是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱�分析物被转化为气相离子而被分析�分析物按其质荷比(m/z)分离而被检测�质谱图即是相关的离子流对m/z的图�MS的特点：�灵敏度高�定性/定量本领高�脉冲扫描采集数据�高真空环境工作（10-7~10-9psi）�溶剂参与反应(大气压电离源)质荷比m

4、/z液质联用数据的获得离子化离子过滤离子检测谱图记录离子源分析器检测器数据处理接口液相HPLC样品引入色谱分离质谱图液质联用数据形式质谱响应强度LC-MS总离子流图(Totalionchromatography)Response/IntensitytR=20.49min质谱图(Massspectrum)(M-H)-m/z=353.3绿原酸MW=354质荷比m/z保留时间RetentionTime液质联用分析特点（一）�更丰富的化合物信息Quinicacidm/z353(M-H)-m/z191(qunicacid-H)-m/z17

5、3(qunicacid-H2O-H)-Caffeicacidm/z111(qunicacid-2H2O-CO2-H)-一级质谱MS353>二级质谱MS2353>173>三级质谱MS3液质联用分析特点（二）�更好的选择性•不同荷质比的信号截然不同•在样品未完全分开的情况下，进行可靠、快速分析121tR=17.89min,m/z=511.02tR=18.39min,m/z=705.4液质联用分析特点（三）�更高的灵敏度•尤其适用于复杂基质中化合物的分析•达ng甚至pg级（A）20g药材以酸水提取，经过阳离子交换树脂除杂、纯化和富集处

6、理，HPLC-UV(223nm)检测(LOD>100ng)120000倍1（B）0.3g药材以酸水提取，HPLC-MS(SIMm/z366)检测(LOD=5pg)液质联用类型QuadrupolesIonTrapHPLCLTQOrbitrapQ-TOFUPLC二、液质联用接口技术二、液质联用接口技术二、液质联用接口技术二、液质联用接口技术液相色谱接口质谱物态组分存在带电状态在高真空于大气压真空度工作条件条件下的下的检测溶液之中气相离子雾化，去溶剂，电离12液质联用接口技术1970's~•液体直接导入接口•连续流动快原子轰击离子化发

7、生•传送带式接口在低压区•离子束接口•热喷雾接口(电子轰击/化学电离)Prof.Dr.WilfriedM.A.NiessenJournalofChromatographyA•电喷雾离子化技术离子化发生703(1995)37-57在常压区794(1998)407–435•大气压化学离子化技术常规电离技术样品引入液质联用接口至离子源质量分析器检测器真空高真空部分•电离发生在真空条件下，为避免大量溶剂连续进入离子源破坏真空，必须在分析物进入真空之前，将溶剂除去•靠溶剂和分析物的挥发度和动量不同，将小量分析物从大量溶剂中分离，送入离子源

8、•电子轰击电离(ElectronImpact),化学电离(ChemicalIonization),...大气压电离技术样品引入液质联用接口离子源至质量分析器检测器真空高真空部分•分析物在大气压条件下电离，再进入高真空质谱•被电离的带电荷的分析物从大量来自液相色谱