柴胡茎叶总黄酮正交提取工艺的研究

《柴胡茎叶总黄酮正交提取工艺的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、柴胡茎叶总黄酮正交提取工艺的研究北柴胡（BupleurumchinenseDC.）为伞形科柴胡属植物，收载于中国药典，为药用柴胡的主要种源。柴胡具有驱散退热、舒肝生阳之功效，主治感冒发热、寒热往来、疟疾、胸肋胀痛、月经不调及子宫脱垂等症。现代药理研究证明柴胡具有解热、镇痛、镇静、抗炎、免疫增强、保肝利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用，具有极高的药用研究价值，黄酮类化合物在自然界分布广泛,具有抗氧化、抑菌消炎和抗衰老等功效。柴胡总黄酮具有较強的抗流感病毒作用，而且具有较好的抗炎、降温效果，对多种细胞有较强的抑制或杀灭作用。本文利用不同浓度的乙醇提取，通过正交试验确

2、定北柴胡茎中总黄酮的最佳提取工艺条件，为更有效的开发和利用柴胡资源提供理论参考和实验指导。1材料与仪器1.1材料本品为伞形科植物柴胡（BupleurumchinenseDC.）或狭叶柴胡（Bupleurumscorzoner-ifoliumWilId.）的干燥根。按性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”。1.2试剂芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠和硝酸铝均为分析纯。1.3仪器电热恒温水浴锅（H-H-S21-6C,上海医疗器械五厂）；电子分析天平（FC204,上海精科实业有限公司）；UV-762紫外分光光度计（上海精密科学仪器

3、有限公司）；旋转蒸发器（上海亚蓉生化仪器厂）；snz-D（in）循环水式真空泵，索式提取器，电热鼓风干燥箱；植物粉碎机（FZ102,天津市泰斯特仪器有限公司）2方法2.1柴胡茎叶总黄酮的薄层检测硅胶薄板制作称取4g硅胶G置于研钵中，加入0.5%的竣甲基纤维素钠溶液12ml,研磨15min后铺于20x10cm的干净玻璃平板上，要求平整无气泡，然后晾干即可。展开剂配制取展开剂氯仿:甲醇：水=7:2.5:0.5的比例配制100ml（70:25:5）,取下层液作为展开剂。薄板活化：将制好的硅胶薄板在105°C下活化30mino点样：点样点距板子底端1.5cm左右，所有

4、点样点位于同一直线上，尽可能向中间靠拢，每个点样点点样约20mU点样点尽可能小。饱和：将板子不没入层析缸内的展层剂中，在展层剂的蒸气中饱和约0.5h。层析：将板子下端插入展层剂中进行展开，当展层剂前沿距板子上端约l・5cm时取出板子，自然晾干。观察：紫外灯(365nm)下观察，Rf:,层析图谱如下。展开取出晾干后在紫外灯(365nm)下观察，可见荧光、黄绿色荧光等4—6个斑点，主要为柴胡茎叶总黄酮各种戒及戒元，各斑点Rf在0・5以上分布。2.2紫外分光光度法测定柴胡茎叶总黄酮的含量2.2.1标准液的配制：精密称取120°C干燥恒重的芦丁标准品10mg,置50m

5、L容量瓶中，用60%乙醇溶解并定容得到浓度为0.2nig/mL的芦丁标准溶液。2.2.2标准曲线的绘制:精密量取标准溶液各0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL置于25mL容量瓶中，分别加60%乙醇溶液至10mL,再依次加入ln)L5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置6min后加入1mL10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6min后加入4%氢氧化钠溶液1mL,再加60%乙醇定容，摇匀，放置15min后在510nm处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标，芦丁浓度(mg/niL)为横坐标，制作标准曲线。得到回归方程Y=16・4125X-0・0105,R2=0-9998

6、。2.2.3样品溶液的制备和黄酮含量的测定：准确称取阴干粉碎的北柴胡茎叶20g,按单因素实验和正交试验中不同的提取条件利用索氏提取器回流提取。提取液减压浓缩成膏状，用50mL温水充分溶解置于250mL分液漏斗，用等体积石油瞇萃取3次以除去色素和部分脂溶性成分。水相合并后减压浓缩成膏状于60°C真空干燥箱中干燥至恒重，准确称取干燥粉末20mg用60%乙醇溶解并定容于10mL容量瓶中。依照“2.2.2”项下方法测定吸光度，代入回归方程中计算总黄酮的含量,并计算总黄酮的得率；总黄酮的得率(％)=(提取液中总黄酮浓度x提取液体积)/对应的原料重量X100%。在此过程中

7、分别考察不同乙醇浓度、不同料液比、不同提取时间和温度对总黄酮提取的影响。然后结合正交试验确定最佳提取工艺。3柴胡茎叶总黄酮提取工艺确定3.1柴胡茎叶提取工艺效果的因素实验1.1.1提取溶剂浓度及提取方法的选择提取溶剂的选择主要是根据溶剂的极性及其共存杂质的极性大小来判断。天然有机化合物在溶剂的溶解应遵循“相似相溶”规律，极性化合物倾向于溶于极性溶剂，非极性化合物倾向于溶于非极性溶剂。从北柴胡分离得8个黄酮类化合物：柴胡色原酮酸，芦丁，榊皮素，异鼠李素，异鼠李素3-0-葡萄糖戒,葛根素,7,4，二務基异黄酮7-0-p-D-葡萄糖式，色氨酸。本实验用不同浓度乙醇或

8、甲醇进行热回流、超声提取平行对比实验。