正交设计优选豆腐柴叶总黄酮的微波提取工艺-论文.pdf

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1、第30卷，第5期光谱实验室Vo1．30。No．52013年9月ChineseJournalofSpectroscopyLabolatorySeptember，2013正交设计优选豆腐柴叶总黄酮的微波提取工艺①曹稳根②段红翟科峰单玲玲方雪梅王红艳(宿州学院化学与生命科学学院安徽省宿州市汴河中路7l号234000)摘要采用微波法提取豆腐柴叶总黄酮。以总黄酮提取率为考察指标，在单因素试验基础上，采用正交设计方法优选最佳提取工艺。结果显示．最佳工艺条件为乙醇浓度为7o％，料液比为1；25(g／mL)，微波提取时间6min，微波功率400W，总黄酮平均提取率为6．32％。

2、关键词豆腐柴叶；总黄酮；正交设计；微波提取中图分类号：R284．2~0657．32文献标识码：A文章编号：1004—8138(2013)05—2174—051引言豆腐柴(PremnamicrophyllaTurcz)为马鞭草科豆腐柴属多年生落叶灌木植物，多生于山坡、林下或林缘，分布于我国华东、华中、中南、西南各省区，我国野生资源十分丰富[1]。其根、茎、叶人药，具有活血散瘀、强筋健骨、驱风止痛的功效，民间常用来治疗腰腿痛、跌打损伤、风湿关节炎及感冒身痛、淋巴节炎、肩周炎、肥大性脊椎炎等症，具有较高的药用价值[2]。已有的研究表明，豆腐柴主要含有黄酮类、萜类、酚酸

3、及生物碱等有效成分[5叫]。黄酮类化合物具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗癌、抗氧化、抗衰老、抗抑郁、抗,L,ng血管疾病、抗糖尿病及其并发症、调血脂以及提高免疫力等多种药理作用¨，在医药、食品等领域具有广阔的应用前景。关于微波法提取豆腐柴叶总黄酮的研究尚未见报道，本实验以总黄酮提取率为考察指标，通过单因素试验和正交设计试验对豆腐柴叶总黄酮微波提取工艺进行了研究，旨在为合理开发豆腐柴叶总黄酮资源提供科学的实验依据。2实验部分2．1主要仪器、材料与试剂U一3310型分光光度计(日本Hitachi公司)；MAS一Ⅱ型微波化学试验仪(上海新仪微波化学科技有限公司)；R

4、E一52型旋转蒸发器(上海青浦泸西仪器厂)；HK一04A型200g手提式粉碎机(广州市旭朗机械设备有限公司)；21QX—P1518A型分析实验室专用纯水机(北京群先科技发展中心)。豆腐柴叶2011年7月采集于安徽省皖南地区，鲜叶采集后用清水漂洗沥干，经室温阴干、粉碎后贮存于棕色试剂瓶中备用。芦丁对照品(批号1O080—200707，中国药品生物制品检定所)；无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯。实验用水为超纯水。①安徽省教育厅自然科学研究重点项目(KJ2O12A264)；宿9、H学院生物化学与分子生物学重点学科项目(szxyzdxk2009O1)②联系

5、人，手机：(o)13955726605；E—mail：caowgsz@163．corn作者简介：曹稳根(1964一)，男，安徽省东至县人．教授，主要从事生化分析及天然产物研究工作。收稿日期：2013—02—02；接受日期：2013—02—19第5期曹稳根等：正交设计优选豆腐柴叶总黄酮的微波提取工艺2．2实验方法2．2．1样品溶液的制备准确称取10o目豆腐柴叶粉末1g，置于小烧杯中，用少量乙醇溶解后移至微波瓶中。在料液比1：25(g／mI)、乙醇浓度6O、微波功率400W、微波提取时间6rain及微波温度80~C的条件下进行微波提取。微波提取后过滤，滤液经石油醚萃

6、取去杂后再用60乙醇定容到100mL容量瓶中即得样品溶液，备用。2．2．2校准曲线准确称取干燥至恒重的芦丁对照品11．60mg，置于小烧杯中，用6O乙醇溶解并定容至lOOmL容量瓶中即得对照品溶液。分别准确移取上述对照品溶液0．0、1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、6．OmL于7只25mL容量瓶中，用60乙醇补充至10．0mL，加入5的NaNO。1．0mL，摇匀，放置6min后，加入109／5Al(NOs)s1．OmL，6min后再加入4的NaOH10．0mL，摇匀，用6O乙醇稀释至刻度。15min后于波长400-600nm处扫描，得到最大吸收峰为502n

7、m。以芦丁对照品的浓度x(mg／mL)为横坐标，吸光度值Y为纵坐标，绘制校准曲线，得回归方程为Y一0．03787x一0．00929，r一0．9998。结果表明，芦丁对照品浓度在0一o．02784mg／mL范围内与其吸光度值有良好的线性关系。2．2．3样品中总黄酮含量的测定准确吸取样品溶液lmL置于25mi容量瓶中，按2．2．2节方法测定样品溶液的吸光度值，由回归方程计算出样品溶液中的总黄酮含量，并计算总黄酮提取率。总黄酮提取率()一(CX25×100)／lOOO×lOO％式中：C——测试样品溶液的浓度。2．2．4单因素的实验按2．2．1节样品溶液制备方法，在微波

8、温度80~C的条件下，通