保肾汤防治大鼠高脂血症致肾脏损害实验探究

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1、保肾汤防治大鼠高脂血症致肾脏损害实验探究作者：李慧郑小伟叶忠伟李莉【摘要】［目的］探讨保肾汤防治高脂血症致肾脏损害的疗效及其作用机理。［方法］喂食高脂饲料造成大鼠高脂血症致肾脏损害，保肾汤（高、中、低剂量）同时干预给药12周，实验结束后，分别检测血脂、肾功能、肾脏病理、肾组织FN及TGFBl、CTGFmRNA表达等指标。［结果］保肾汤能改善脂质代谢，降低肾脏指数，减轻肾脏病理变化，抑制肾组织FN产生及TGFBl、CTGFmRNA表达的作用，以高剂量保肾汤作用最为显著。［结论］保肾汤能防治大鼠高脂血症致肾脏损害，其作用机理与抑制肾组织FN产生及TGFBl、CTGFm

2、RNA表达有关，并存在量效依赖关系。【关键词】保肾汤；高脂血症致肾脏损害；血脂；肾功能;肾脏病理；FN；TGFB1；CTGFmRNA；实验研究保肾汤由黄竄、淫羊蕾、当归和大黄组成，合方共奏补益脾肾，祛除痰瘀之效。本研究旨在通过观察保肾汤对高脂血症大鼠血脂、肾功能、肾脏病理、肾组织FN及TGFB1、CTGFmRNA表达的影响，以阐明其防治高脂血症所致肾脏损害的疗效及其作用机理。1材料1.1动物清洁级Wistar雄性大鼠48只，一级质量标准，体重（180±20）g,由浙江中医药大学实验动物中心提供。1.2药品与试剂胆固醇、胆酸钠：郑州利伟生物有限公司。保肾汤药物（黄茂

3、、淫羊蕾、当归、大黄）：浙江中医药大学中医门诊部。舒降之：杭州默沙东制药有限公司。总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、肌肝、尿素氮测定试剂：北京柏定生物工程有限公司。抗纤维连接蛋白（FN）抗体、抗转化生长因子B1（TGFB1）抗体：福建迈新公司。RTRCR试剂盒（检测CTGFmRNA）购于上海生工生物技术服务有限公司。2方法2.1分组、造模及给药实验大鼠先适应性饲养1周，然后随机分为6组：正常对照组（A组）、模型对照组（B组）、舒降之组（C组）、保肾汤低剂量组（D组）、保肾汤中剂量组（E组）保肾汤高剂量组（F组），每组8只。正常对照组每日喂食普通饲料，其余各组

4、每日喂食高脂饲料（普通饲料中加3%胆固醇、1%胆酸纳、7.5%蛋黄粉和10%猪油配成）；与此同时，舒降之组按1.7mg/kg.d灌胃给药，保肾汤低剂量组按10.35g/（kg・d）灌胃给药，保肾汤中剂量组按20.7g/（kg・d）灌胃给药，保肾汤高剂量组按31.05g/（kg・d）灌胃给药，保肾汤由黄茯、淫羊翟、当归、大黄按3：1：1：1比例组合而成，用传统方法煎煮，去渣合并，过滤，浓缩，制成药液。用药各组采用等容积不等浓度药液每日给药1次。各组观察治疗12周。2.2检测指标实验结束后，采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆

5、固醇(HDLC)、肌肝(Scr)和尿素氮(BUN):称大鼠体重与肾重,计算肾脏指数；肾组织作HE染色，显微镜下观察肾脏病理变化；免疫组化Envision法检测肾组织FN及TGF01表达,采用三高CMIAS9813型多功能彩色计算图像分析系统对FN及TGFB1进行半定量分析；RTPCR法检测CTGFmRNA表达情况，并以相对表达量来计算表达水平。2.3统计学处理采用SPSS13.0forWindows统计软件，对实验数据进行单因素方差分析，实验数据以平均数土标准差(x±s)表示。3结果3.1血脂情况模型对照组血清TC、TG较正常对照组显著增高(P<；o.01),

6、HDLC较正常对照组显著降低(P<；O.01)；保肾汤高剂量组血清TG较模型对照组、舒降之组明显降低(P<；0.01)；保肾汤各治疗组血清TC较模型对照组显著下降(P<；0.01),且高剂量组明显低于中剂量、低剂量组(P<；o.05,P<；0.01);保肾汤高剂量组血清HDLC较模型对照组显著升高(P<；O.01),且明显高于低剂量组(P<；0.05)o详见表1。表1各组大鼠血脂情况3.2肾功能情况模型对照组Ser、BUN与正常对照组比较有上升趋势，但无显著性(P>；0.05)；各治疗组Ser.BUN与模型对照组比较无显著性差异(P

7、>；0.05),但有下降趋势，以保肾汤高剂量组较为明显。详见表2。表2各组大鼠血清BUN、Ser情1.3肾脏病理、FN及TGFB1情况情况模型对照组肾脏指数较正常对照组显著升高(P<；0.01),系膜细胞增生，系膜基质增多，系膜区扩大，偶见肾小球局灶节段性硬化等；保肾汤高、中剂量组肾脏指数较模型对照组明显降低(P<；0.01,P<；0.05),各治疗组系膜细胞增生、系膜基质增多及系膜区扩大等改变呈不同程度地减轻，以保肾汤高剂量组减轻较为明显。见表3o模型对照组肾组织FN及TGFB1较正常对照组显著增高(P<；0.01)；保肾汤高剂量组FN较模型

8、对照组显著