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《大鼠脊髓前角神经元内维生素D依赖性钙结合蛋白与小白蛋白共存（医学论文）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、大鼠脊髓前角神经元内维生素D依赖性钙结合蛋白与小白蛋白共存【关键词】维生素D依赖性【Abstract】AIM:ToobservethecoexistenceofcalbindinD28k(CB)withparvalbumin(PV)inneuronsoftheanteriorhornofthespinalcordinrats・METHODS:Immunofluorescencehistochemicaldoublestainingmethodwasused・RESULTS:Someofthemediumandsmallsizedneuronsinthean
2、teriorhornofthespinalcordshowedCBorPVimmunopositivestaining・ThemajorityoftheCBimmunoreactiveneuronsalsoexhibitedPVimmunoreactivities,i.c.CBandPVcoexistedintheseneurons・CONCLUSION:CBandPVcoexistinsomeoftheneuronsintheanteriorhom.CB/PVdoublelabeledneuronsmightbelongtoRenshawcellsand
3、theymayhavesomefeedbackinhibitoryregulatoryeffectsontheactivitiesofamotorneuronsintheanteriorhorn.[Keywords]spinalcord;anteriorhorn;calciumbindingprtein,vitaminDdependent;parvalbumins;Renshawcell【摘要】目的：观察大鼠脊髓前角神经元内维生素D依赖性钙结合蛋白(CB)与小白蛋白(PV)的共存情况.方法：免疫荧光组织化学双重标记技术.结果：脊髓前角内的部分中、小型神经元
4、呈CB或PV阳性;绝大部分CB阳性的前角神经元亦呈PV阳性,即CB与PV共存于这些神经元.结论：CE与PV共存于部分前角神经元，这些神经元可能为Renshaw细胞并参与对前角a运动神经元的反馈抑制调控.【关键词】脊髓；前角；钙结合蛋白质，维生素D依赖性；小白蛋白；Renshaw细胞0引言脊髓前角内除含有运动神经元外，还含有形态各异的中间神经元.由于这些神经元所含的神经递质或化学成分不同，功能也各异.目前认为多数中间神经元因发生、发育和所处部位不同，它们常与运动神经元构成局部回路参与姿势反射和运动调节[1,2];又因为中间神经元含Y氨基丁酸(GAEA)等抑制
5、性递质，其主要功能是对运动神经元起抑制作用[3,4]・维生素D依赖性钙结合蛋白(calbindinD28k,CB)与小白蛋白(parvalbumin,PV)是最常见的和功能比较明确的两种钙结合蛋白(calciumbindingproteins,CaBPs),它们与细胞内Ca2+的存储和释放密切相关，并能调节神经递质的释放和影响代谢[5,6]・Renshaw细胞是数量较多的抑制性中间神经元，以往的免疫组化研究显示其胞体多呈CE阳性[4],但CE与PV是否共存于Renshaw细胞，未见报道.我们用免疫荧光组织化学双重标记技术对此进行了观察.1・1材料成年SD大
6、鼠16只，雌雄不拘，体质量250-300g,由第四军医大学实验动物中心提供.1・2方法1・2・1灌注固定戊巴比妥钠(100mg/kg)腹腔麻醉后开胸,经左心室插管至升主动脉，先用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液(PBS,pH7.3)100mL冲净血液，然后用500mL含40g/L多聚甲醛、0.5g/L戊二醛和2.5g/L苦味酸的0.1mol/L磷酸缓冲液(PE,pH7.3)灌注固定1h.灌毕取出脊髓，置入上述新鲜固定液中后固定4h(4°C),再移入含300g/L蔗糖的PE中过夜.将脊髓冠状冰冻切片，片厚20pm,切片分为4组.分别收集于0.01mol/L的
7、PES(pH7.3)中.将第1组切片裱于经明胶处理的载玻片上，5g/L的中性红染色，以便对照观察.1.2.2免疫荧光组化染色CB和PV的免疫荧光组化双重染色:将第2,3组切片在常温下进行CB和PV的免疫荧光组化双重染色.步骤如下：①分别用兔抗PV血清(1:8000,Sigma)/小鼠抗CB血清(1：5000,Sigma)孵育24h,孵育液为含3g/LTritonX100和25g/L正常驴血清的PBS(PBSNDS);②Biotin结合的驴抗兔IgG(1:200,Chemicon)孵育3h;③100g/L正常兔血清孵育30min;④5g/LAvidin结合的
8、TexasRed(Vector)和5g/LDTAF标记的驴抗小鼠I
