大鼠脊髓前角神经元内维生素d依赖性钙结合蛋白与小白蛋白共存

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1、大鼠脊髓前角神经元内维生素D依赖性钙结合蛋白与小白蛋白共存【关键词】维生素D依赖性　　【Abstract】AIM:ToobservethecoexistenceofcalbindinD28k(CB)in(PV)inneuronsoftheanteriorhornofthespinalcordinrats.METHODS:Immunofluorescencehistochemicaldoublestainingmethodeofthemediumandsmallsizedneuronsinthea

2、nteriorhornofthespinalcordshomunopositivestaining.ThemajorityoftheCBimmunoreactiveneuronsalsoexhibitedPVimmunoreactivities,i.e.CBandPVcoexistedintheseneurons.CONCLUSION:CBandPVcoexistinsomeoftheneuronsintheanteriorhorn.CB/PVdoublelabeledneuronsmightb

3、elongtoRenshaayhavesomefeedbackinhibitoryregulatoryeffectsontheactivitiesofαmotorneuronsintheanteriorhorn.　　【Keybindingprtein,vitaminDdependent;parvalbumins;Renshain,PV）是最常见的和功能比较明确的两种钙结合蛋白（calciumbindingproteins,CaBPs），它们与细胞内Ca2+的存储和释放密切相关，并能调节神经递质的

4、释放和影响代谢［5,6］.Renshag/kg）腹腔麻醉后开胸，经左心室插管至升主动脉，先用0.01mol/L磷酸缓冲盐溶液（PBS,pH7.3）100mL冲净血液，然后用500mL含40g/L多聚甲醛、0.5g/L戊二醛和2.5g/L苦味酸的0.1mol/L磷酸缓冲液（PB,pH7.3）灌注固定1h.灌毕取出脊髓，置入上述新鲜固定液中后固定4h（4℃），再移入含300g/L蔗糖的PB中过夜.将脊髓冠状冰冻切片，片厚20μm，切片分为4组.分别收集于0.01mol/L的PBS（pH7.3）中.将

5、第1组切片裱于经明胶处理的载玻片上，5g/L的中性红染色，以便对照观察.　　1.2.2免疫荧光组化染色CB和PV的免疫荧光组化双重染色：将第2,3组切片在常温下进行CB和PV的免疫荧光组化双重染色.步骤如下：①分别用兔抗PV血清（1∶8000,Sigma）/小鼠抗CB血清（1∶5000,Sigma）孵育24h，孵育液为含3g/LTritonX100和25g/L正常驴血清的PBS（PBSNDS）；②Biotin结合的驴抗兔IgG（1∶200,Chemicon）孵育3h；③100g/L正常兔血清孵育

6、30min;④5g/LAvidin结合的TexasRed（Vector）和5g/LDTAF标记的驴抗小鼠IgG（Chemicon）孵育3h.将切片裱于经明胶处理的载玻片上避光干燥，用含500g/L甘油的PBS封片.用荧光显微镜（BX60;Olympus）在不同的滤镜下观察TexasRed（激发波长530～580nm，发射波长≥610nm）和DTAF（激发波长450～490nm，发射波长515～565nm）标记的阳性结构.　　3讨论　　脊髓前角的灰质中，除了位于Ⅸ层支配梭外肌和梭内肌的α运动神经元

7、和γ运动神经元以外，Ⅷ层内还存在许多形态多样、性质和种类不同的中间神经元，其中的部分小型中间神经元属于轴突短且具抑制效应的Renshaotoneuronsinnervatingthesoleusmuscleinmice,rats,andcats［J］.NeurochemRes,2001;26(12):1301-1304.　　［3］J,MatiseMP.Topographicalandphysiologicalcharacterizationofinterneuronsthatexpresseng

8、railed1intheembryonicchickspinalcord［J］.JNeurophysiol,2000;84:2651-2657.　　［4］SapirT,GeimmanET,ilMedUniv,2001;22(3):259-261.　　［7］DouradoM,SargentPB.PropertiesofnicotinicreceptorsunderlyingRenshaotorneuronsinneonatalratspinalcord［J］.JNeurophysiol,2002;