组胺降解菌株鉴定方法概述【文献综述】

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1、毕业论文文献综述食品质量与安全组胺降解菌株鉴定方法概述摘要：本文根据微生物的普遍鉴定方法，概述了组胺降解菌的的形态特征鉴定方法，生理生化鉴定方法与分子鉴定中的应用16SrRNA和16SrDNA的细菌鉴定方法。关键词：组胺；生理生化；分子鉴定0前言由于组胺中毒事件发生频率较高，每次涉及的人数较多，且一些冷冻产品和加工制品被检出组胺含量超标的案例不断上升，所以世界各国对组胺的相关研究一直是近年来水产品行业的研究热点之一。目前，我国的相关研究大多集中在组胺的检测方法的探索以及与组胺相关的鲭鱼中毒的流行性病学报道。比如范青霞、曾艳、李青等分别报道了近年来因食用鲭科鱼类而产生的中毒案

2、例[1]-[3]。另有10多篇文献报道了不同的组胺分析检测方法，如分光光度法、高效液相色谱法，等离子色谱法等[4]-[7]，这些研究主要涉及罐头、鱼粉等不同样品。而国外对组胺的相关研究要进行的深入且全面，包括组胺的萃取、分离、检测分析以及形成机理等各个方面[8]-[10]。相比较而言，各国对组胺的控制降解技术的研究，特别是工业化的脱组胺工艺的研究各国还较为薄弱。组胺一经产生，就很难去除，从而造成巨大经济损失与安全隐患。为防止食物中毒以及经济损失应该从组胺这一源头抓起，所以，组胺降解技术暨微生物降解技术的研究对社会经济与食品安全发展有重大意义。本文根据微生物鉴定通用检测方法，

3、将其运用到组胺降解菌株的鉴定中，综述了组胺降解菌株的几种鉴定方法。1形态观察[11][12]1.1显微观察将适量菌株在载玻片上进行涂布，并令其自然干燥，然后手执载玻片一侧，标本面朝上，在火焰外侧往复3-4次，待冷却后滴加结晶紫染液，使整个标本固定在染色液中。染色1-3min后，在显微镜观察菌体的形态。1.2革兰氏染色在干净载玻片上，用接种环挑取少许菌种，于载玻片上无菌水滴边缘涂片，待自然风干后，在火焰外侧往复3-4次，待冷却后滴加结晶紫染液染色lmin，然后用水冲净结晶紫液。滴加碘液冲净残水，并覆盖约lmin。用水冲去碘液，将片上的水甩干。滴加95%乙醇液脱色约20-30s

4、，并立即用水冲净乙醇。再用蕃红液染1-2min之后洗净蕃红，待玻片风干后用显微镜油镜观察涂片。1.3芽孢染色取培养24h左右的菌株进行涂片、干燥和固定，然后滴加3-5滴孔雀绿染液于己固定的涂片上。用木夹夹住载玻片在火焰上加热（使染液冒蒸汽但勿使沸腾）。加热时间从冒蒸汽时开始计时约4-5min。倾去染液，待载玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。再用蕃红水溶液复染lmin，水洗。待干燥后，置油镜观察。2生理生化鉴定[7][11][12]2.1糖酵解试验在无菌操作下，用接种针或环移取菌种少许，接种于葡萄糖发酵液体培养基管中，并在36±1℃条件下培养。每天观察培养基颜色有无改变（产

5、酸），小倒管中有无气泡（微小气泡亦为产气阳性）。2.2淀粉水解试验以培养18~24h的菌株，涂布接种于淀粉琼脂斜面上，在36±1℃培养条件下培养24~48h。将碘试剂滴在培养表面上，立即检验结果。若为阳性反应（淀粉被水解），则琼脂培养基呈深蓝色、菌落周围出现无色透明环；若为阴性反应（淀粉未水解），则菌落周围没有透明环。2.3VP试验将菌株接种于VP试验培养基中，在36±1℃培养条件下培养4-6d。取培养液(约2mL)和等量的40%NaOH溶液混合，加入少量(约0.5-1mg)肌酸，摇动2--5min。阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1℃恒温箱中，若2h

6、内仍不显现红色，则为阴性。2.4甲基红（MethylRed）试验将菌株接种于通用培养基，培养于36±1℃环境中3-5天。从第二天起，每日取培养液1mL，加甲基红指示剂1-2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色（目前发现阳性或至第5天仍为阴性即可判定试验结果）。2.5靛基质（Imdole）试验将菌株接种于试验培养基管中，在36±1℃条件下培养24h，取约2mL培养液，加入Kovacs氏试剂2-3滴，轻摇试管，呈红色为阳性。2.6硝酸盐（Nitrate）还原试验在试验前将试剂的A（磺胺酸冰醋酸溶液）和B（α-萘胺乙醇溶液）试液各0.2mL等量混合，取混合试剂约0.1mL

7、，加于液体培养物或琼脂斜面培养物表面，立即或于10min内呈现红色即为试验阳性；若无红色可再加一滴二苯胺试剂，如呈蓝色则无硝酸盐还原作用，否则按硝酸盐还原阳性处理。2.7明胶（Gelatin）液化试验将菌接种于明胶明胶高层约2/3深度或点种于平板养基中，在20-22℃条件下培养7-14d。再放入4℃冰箱中，观察培养基还能不能凝固，若不能凝固，则明胶被液化，呈阳性；能凝固即明胶未被液化，呈阴性。2.8尿素酶（Urease）试验将培养18-24h的菌种大量接种于液体培养基管中并摇匀，在36±1℃条件下分别培养10，60