检测组胺方法的探讨【文献综述】.doc

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1、毕业设计文献综述生物科学检测组胺方法的探讨［扌商要］一种物质的测定，首先需要把该物质从样品屮分离出来，而样品屮所含组分一般都较复杂，所以需要一种有效分离手段，将样品各组分迅速分离。高效液相色谱作为一种高效分离手段，在纟R胺(histamine)的检测屮运用较多。随着饮食健康的深入人心，组胺作为食物是否含毒性的重要指标，备国对进出口水产品屮组胺含量的要求也越来越严格。木文主要论述了高效液相色谱法检测出口水产品屮组胺含量。［关键词］组胺高效液相色谱水产品组胺(hislamine)是存在于肥人细胞和嗜碱性粒

2、细胞颗粒屮的活性介质，因过敏原刺激嗜碱性粒细胞、肥大细胞脱颗粒而被释放，可发挥促平滑肌收缩、血管扩张、增强毛细血管通透性和黏膜腺体分泌等效应，介导I型超敏反应发生。高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气象色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送，色谱柱是一特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效远远高于经典液相色谱；同时柱后还有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。与组胺产生有关的细菌普遍存在于盐水环境中。它们一般存在于活的海鱼的鲤和内脏(肠)中而且不对鱼产生危害。鱼一旦死亡，鱼类的防

3、御系统不能抑制细菌的生长，形成纟R胺的细菌开始生长，并且产生组胺。在一卫生的条件下取出内脏并去除鱼鲤可以降低但不能消除形成纟R胺的细菌数量。然而，当在不卫生环境下操作，由于细菌扩散到鱼肉部分，这些步骤可能加速在鱼的可食部分的组胺的产生过稈。1国内外检测组胺方法的探讨：1.1荧光分析法荧光是物质分了吸收光了能量被激发示，从激发态的最低振动能级返冋到基态时所发射出的光。在有机化合物屮，脂肪族化合物的分了结构较简单，能产生荧光的为数不多;芳香族及具有芳香结构的化合物，因存在共辘体系而容易吸收光能，在紫外光照

4、射下很多能发射荧光。有时为了提高测定的灵敏度和选择性，常使弱荧光性物质与某些荧光试剂作用，以得到强荧光性产物。5・HT属阿味胺类化合物，由蚓味和乙胺两部分构成，眄I味具有苯并毗咯的结构;HA在化学上属咪卩坐类，为含两个杂原了的五元杂环。5・HT和HA的分子结构屮祁存在有多少不等的共辘体系，可以用荧光法测定HA［2］。七、八十年代荧光法以其特异、敏感、重复性好的优点，曾得到广泛应用。但随着色谱法的发展，已逐渐被取代，特别是对于一些含量其微的样品，荧光法的灵敏度已达不到要求，因而荧光法检测HA近年来并不多

5、见。1.2酶联法Engvall和Perlmann(1971)首先丿M川建立这种方法，称为酶联免疫吸附测定(enzyme・linkedimmunosorbentassay,ELISA）。它是用酶一底物反应来检测抗原或抗体的方法。酶通常被偶联到抗体上，关键是既要保留偶联物的酶学活性，又要保留其免疫学作用。酶偶联物的量由其合适的底物的颜色变化决定。所用的酶需有能产生易测定的有色或荧光产物的底物。随着免疫和分了生物技术的发展，多克降抗组胺抗体以及抗血清索抗体的出现，商品化的ELISA测试盒也可用来检测HA。在

6、原则上ELISA和放射免疫测定（RIA）很相似，ELISA相对而言有快速、价廉、检测设备简单的优点。但对HA而言，采用ELISA进行检测，抗原抗体的特异性操作掌握起来有一定难度，而且难于精确定量，不适合含量较低的生物样品的检测。1.3气象色谱法决定物质能否使用气相色谱进行分离检测的一个关键因素是该物质的挥发性。HA带有极性基团（-0H）,组胺可以形成分子间的氢键，不易气化，组胺的熔点83°C〜84°C,沸点209oC-210oC（18mmHg）,若高温气化时很容易破坏。不过可通过衍生化反应使其转化为易

7、挥发性衍生物的方法，如硅烷化或氟化后挥发性增加，能降低气化温度进行气相色谱分离分析。可与电了捕获检测器（GC-ECD）或质谱（GC・MS）联用进行检测⑷。虽然此检测方法能进行准确定量，但也存在一些缺点，首先是样品前处理复杂，必须进行衍生化反应，使其挥发性增加，从而提高了实验的难度;其次是仪器价格昂贵，实验成木过高，在一定稈度上也限制了该方法的推广应用。1.4高效液相色谱法样品通常用高氯酸来沉淀蛋A,通过匀浆、低温高速离心后,上清液可直接进样。该方法局限性小,操作方便，检测结果精确，故而高效液相色谱法成

8、为检测水产品屮组胺含最的最常见方法2高效液相色谱特点高压——压力可达150〜300kg/cm2o色谱柱每米降压为75kg/cm2以上。高速——流速为0.1〜10.0mL/min0高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达O.Olngo同时消耗样品少。3高效液相色谱法的优点速度快——通常分析一个样品在15-30min,有些样品甚至在5min内即可完成。分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效