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1、围产期孕妇B组链球菌检测的临床意义【中图分类号】R71【文献标识码】A【文章编号】1004—7484(2013)09-0711-02B族链球菌(groupBstreptococci,CBS)是一种革兰阳性球菌，常定植于人下生殖道及胃肠道，也可定植于婴幼儿上呼吸道［1-2］o20世纪60年代首次发现其可导致严重的新牛儿感染，随后进行了大量的研究，发现B族链球菌在
2、韦
3、产期感染中是第一位的致病菌，可导致围产儿死亡。同时也是孕产妇生殖道感染的重要致病菌，可以导致泌尿系统感染、羊膜绒毛膜炎、产褥感染、孕产妇败血症和早产［3-6］o1996年美国疾病控制和预防中心(
4、CentersforDiseaseControlandPrevention,CDC)联合其他专业机构，制定了“围产期B族链球菌疾病预防指南”，于2002年进行了一次较人的修改，并在2010年11月更新了指南。经过10年多的实践，新生儿GBS感染率下降了约80%［7］。长期以来我国对B族链球菌感染现状不够重视，直至近期，国内报道了一些B族链球菌感染导致新生儿死亡的病例，且研究提示，新生儿肺炎死亡病例中，B族链球菌是第一位的致病菌［8-9］。因此，本研究旨在比较不同方法检测B族链球菌阳性的准确性，了解妊娠晚期B族链球菌带菌状况及其对妊娠结局的影响。1材料与方法
5、1.1研究对象收集2011年5月〜2012年12月在我院妇产科住院和门诊进行B组链球菌检测的孕妇1100例，孕期为35~37周,平均年龄26.5±14.2岁，其中高龄孕妇（上35岁）109例。经产妇81例，初产妇910例。所有孕妇的孕周均经末次月经、早中孕期B超检查进行确认和核对。近期药物应用史，经孕妇知情同意，取材由临床医师规范采集阴道和直肠拭子2份，立即送检。1.2实验材料ToddHewrtt培养肉汤、哥伦比亚血琼脂、胎牛血清购于美国Gibco公司，rapidID32STAEP鉴定板条购于法国梅里埃公司，B组链球菌核酸检测试剂盒由中国泰普生物科技有限公
6、司提供，实时荧光PCR仪购自是美国Stratagonc公司。1.3方法1.3.1标本采集：具体方法参照2002年CDC推荐的取材方法[10],取材时不需要使用阴道窥器，每例孕妇用两根拭子（阴道下1/3内分泌物,肚门括约肌上2〜3cm处直肠分泌物）同时取材，一份用于细菌培养，一份用于实时PCR技术检测。1.3.2GBS的分离细菌与培养鉴定：将采集的拭子及时送检实验室，首先在安全柜内将沾有分泌物拭子头剪下置于增菌ToddHewrtt肉汤中，37°C18~24h后，分别接种于10%胎牛血清和哥伦比亚血琼脂平皿，5%C02环境、37°C18〜36h,挑取有B溶血环
7、的细小菌落，经革兰染色镜检为阳性球菌，触酶试验阴性，进行rapidID32STAEP板条鉴定，若为B组链球菌，再进行细菌药敏MC实验。1.3.3GBS核酸的提取和实时荧光PCR检测：将収样后的拭子内加入1ml清洗液（试剂盒内提供），室温震荡5min,收集清洗拭子后的液体至1.5ml离心管,12000rpm/min离心3min,弃上清，加入清洗液lml,离心后弃上清，再取80ul清洗液重悬沉淀，加入固型DNA提取物0.lg,震荡5min后，95°C2min,冰上5min,12000rpm/min离心5min,然后取上清进行PCR扩增。实时荧光PCR扩增程序参
8、照说明书进行操作。1.3.4测序鉴定：扩增后PCR产物送上海生物工程股份有限公司进行测序分析。1.4统计学分析应用统计学软件SPSS13.0对所有检测数据进行分析，计量资料以x±SD表示，计数资料进行X2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1两种方法检测GBS感染的比较培养法检测的阳性率为6.1%(67/1100),实时荧光PCR检测法的阳性率为11.3%(124/1100),两种方法的相比差异有统计学意义(X2=8.7,P<0.05)；以培养为金标准，对实时荧光PCR法进行评价，结果显示：PCR检测法的R0C曲线下面积为0.93,灵敏度为1
9、00%,特异度为95.2%,youden指数为0.952。见图1。2.2GBS感染对围产期孕妇妊娠结局的影响对1100例围产期孕妇GBS感染阳性和感染阴性的孕妇妊娠结局进行比较，GBS感染阳性的围产期孕妇胎膜早破和宫内感染的机会增加，新生儿感染的发生率升高，无异有统计学意义(p<0.05)o3讨论B族链球菌是一种寄生于人类下消化道及泌尿生殖道的条件致病菌。流行病学研究表明，不同地区、不同种族的妊娠晚期妇女B族链球菌带菌率为6.5%〜36.0%,国内报道的妊娠妇女B族链球菌带菌率为10.1%〜32.4%[11]。国内研究标本多取于阴道后穹隆分泌物，并口检测孕
10、周也不完全相同，方法与国际通用的方法有一定的差异，因此，需要进行相
