10种形态相似川茶花品种的分子鉴定【开题报告】

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1、毕业论文开题报告生物技术10种形态相似川茶花品种的分子鉴定一、选题的背景与意义茶花(CamelliaJaponicaL.)为山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)常绿灌木或小乔木的统称，是我国十大名花之一，其花姿丰盈、高雅，树高可达3-4米，树干平滑无毛，大多数花重瓣鲜艳美丽，具有很高的观赏和生态价值，在盆栽和园林绿化中广泛应用，国内茶花年产值已超过3.0亿元。在长期的发展过程中，由于茶花品种间自然或人工杂交，使得很多品种的花色花型、外部形态极其相似，品种间很难区分，这给川茶花品种分类和杂交育种亲本选配等工作带

2、来很大困难，搞清相似品种间的遗传差异，对茶花品种的鉴别及育种工作具有重要意义。ISSR(inter—simplesequencerepeat)是一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记技术，由Zietkiewiez等在1994年创建，它具有多态性高、稳定性强、检测方便、成本低等特点，因此在植物的品种鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱的构建等方面得到了广泛的应用。本研究建立茶花基于ISSR标记的分子鉴定方法，利用ISSR标记对外部形态特征极其相似的茶花品种进行品种间鉴定，为相似品种间的准确区分提供依据。二、研究的基本内容与拟解决的主

3、要问题：1．研究的基本内容：①茶花DNA的提取方法研究②ISSR引物筛选研究③扩增条件的建立研究④利用建立的ISSR分子标记对4组外部形态特征极其相似的茶花品种进行品种间分子鉴定。2．解决的主要问题：（1）ISSR引物筛选；（2）形态特征极其相似的茶花品种的ISSR分子分析。三、研究的方法与技术路线：研究方法：1．材料的处理将采回的新鲜山茶叶片用纸包好，做好记录，放入袋中用变色硅胶干燥。2．DNA的提取用改良的CTAB法提取材料叶片中的DNA，用琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量与浓度。提取的DNA稀释后-20℃保存备用。3．IS

4、SR-PCR3.1引物设计：通过阅读相关文献，挑选出适合该实验的引物，从某生物公司订购。3.2引物筛选：筛选电泳条带清晰且重复性好的引物。3.3PCR：确定PCR反应体系，用PCR仪进行扩增反应。PCR产物用3%的琼脂糖凝胶电泳。用凝胶成像系统观察，拍照，获得电泳图。4．数据分析观察得到的条带是否具有多态性，计算出多态性条带比例，以及几种相似茶花的遗传相关系数。技术路线：新鲜茶花叶片变色硅胶干燥CTAB法提取DNA电泳测DNA纯度与浓度稀释过的DNA-20℃保存备用ISSR引物设计ISSR引物筛选ISSR-PCR反应条件优化

5、进行PCR条带扩增PCR结果跑电泳、拍照品种的分子鉴别四、研究的总体安排与进度：2010年11月—2011年1月：1、实验前的准备工作：查找资料，写开题报告和论文综述；2、开始翻译外文文献。2011年2月—2011年3月：1、茶花DNA的提取2、ISSR引物筛选研究3、扩增条件的建立4、对形态特征极其相似的茶花品种进行品种间分子鉴定5、完成外文文献翻译。2011年4月—2011年5月：1、分析相关数据，整理试验结果，补充完善相关实验；2、论文写作及修改。五、主要参考文献：[1]ZietkiewiezE,RafalskiA,L

6、abudaD.Genomefingerprintingbysimplesequencerepeat(SSR)-anchoredpolymerasechainreactionamplification[J].Genomics,1994,20(2):176-183.[2]IanD.Godwin,ElisabethA.B.Aitken,LawrenceW.Smith.Applicationofintersimplesequencerepeat(ISSR)markerstoplantgenetics[J].Electrophores

7、is,1997,18:1524-1528.[3]朴红梅,李万良,穆楠等.ISSR标记的研究与应用[J].吉林农业科学,2007,32(5):28-30.[4]宁静,朱旗,黄建安等.ISSR分子标记及其在茶树遗传育种研究中的应用[J].茶叶科学技术,2008,(2):5-8.[5]欧阳彩虹,何桥,秦国新等.25个菊花品种遗传多样性的ISSR分析[J].山西农业大学学报：自然科学版,2010,30(3):201-204.[6]冷言峰,马云芳,何桥等.几个槐树植物的ISSR鉴定[J].西南师范大学学报：自然科学版,2007,32(

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