坛紫菜Mn-sod 的克隆与分析【毕业设计】

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1、本科毕业设计（20__届）坛紫菜Mn-sod的克隆与分析21目录前言1材料与方法………………………………………………………………………………………11.1实验材料…………………………………………………………………………………...11.1.1实验样品……………………………………………………………………………11.1.2菌体和载体………………………………………………………………………....11.1.3试剂、试剂盒和常规分子生物学实验方法………………………………………21.1.4实验仪器……………………………………………

2、………………………………21.2实验方法…………………………………………………………………………………...21.2.1紫菜基因组及总RNA的提取…………………………………………………….21.2.2Dnase处理总RNA…………………………………………………………………21.2.3第一链cDNA的合成………………………………………………………………21.2.4Mn-sod基因cDNA及基因组部分序列的克隆……………………………………31.2.4.1使用RT-PCR克隆Mn-sod基因cDNA部分序列………………………

3、31.2.4.2Mn-sod基因组部分序列的克隆………………………………………….41.2.5采用RACE技术获得Mn-sod基因的cDNA全序列…………………………….41.2.5.1Mn-sod基因3′端cDNA序列的获得…………………………………..41.2.5.2Mn-sod基因5′端cDNA序列的获得…………………………………..51.2.6采用GenomeWalking技术获得Mn-sod基因全序列…………………………..61.2.6.1染色体步移原理………………………………………………………….61.2.

4、6.2染色体步移技术操作步骤……………………………………………….61.2.7Mn-sod基因开发阅读框（ORF）的扩增及内含子验证…………………………91.2.8实验结果分析………………………………………………………………………92结果与分析………………………………………………………………………………………92.1坛紫菜基因及总RNA的提取…………………………………………………………....92.2Mn-sodcDNA核心片段的获得与分析………………………………………………….102.3Mn-sodcDNA全长的获得

5、及分析……………………………………………………….102.3.1Mn-sod基因3′端和5′端的克隆………………………………………………102.3.2Mn-sod基因编码区（ORF）的克隆……………………………………………..112.3.3Mn-sod基因cDNA序列分析……………………………………………………..112.4Mn-SOD基因组全长的获得及分析………………………………………………….....132.4.1Mn-SOD染色体步移结果………………………………………………………...132.4.2Mn-SOD的

6、基因组结构…………………………………………………………...142.4.3Mn-SOD蛋白质性质分析………………………………………………………...152.4.4Mn-SOD二级结构分析…………………………………………………………...172.4.5Mn-SOD三维结构预测…………………………………………………………...172.4.6Mn-SOD蛋白的分子进化分析…………………………………………………...182.4.7Mn-SOD蛋白相关物种同源性及系统进化分析………………………………...183讨论…………………

7、…………………………………………………………………………..193.1紫菜基因组和总RNA的提取…………………………………………………………...193.2基因核心片段及全长的获得…………………………………………………………….193.3Mn-SOD基因序列分析…………………………………………………………………..20214小结与展望……………………………………………………………………………………..2021摘要：抗氧化酶类在植物抗逆防御中具有重要作用，为研究紫菜抗逆的分子机制，用PCR的方法，从坛紫菜（Porphyr

8、ahaitanensis）cDNA中成功扩增出锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因cDNA及基因组DNA全长序列，并进行测序分析。该cDNA序列全长935bp,包括起始密码子和终止密码子。氨基酸编码区起始于本序列的118bp，终止于792bp，共编码234个氨基酸。其基因组序列全长1637bp，含有4个外显子和3个内含子，预测其编