食用菌的实验

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1、实验一母种培养基的制作一、本次实验的目的和要求学会母种培养基的配制方法，了解食用菌母种制作的工艺流程和制作母种的基本技能。二、实验内容或原理母种培养基配制。工艺流程：培养基配方培养基的配制分装试管理灭菌摆斜面三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、高压灭菌锅、电炉、天平、试管、试管架、漏斗、漏斗架、橡皮管、玻璃管。试剂：、马铃薯、葡萄糖、琼脂等。四、实验步骤1.培养基配方以PDA培养基为例，马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。为经强化营养或准备保藏菌种，可添加KH

2、2PO43g、MgSO4.7H2O1.5g、VB110mg。2.培养基配制首先将马铃薯去皮、洗净、挖去芽眼、切成薄片，称取200g，放入铝锅中用1000ml清水加热煮沸，维持20min左右，煮至软而不烂为止。用双层湿沙布过滤，然后取滤液并补足蒸发损失的水分。再加入琼脂继续加热泪，待琼脂溶化后，添加葡萄糖及其它成分，搅拌均匀后准备装管。3.分装试管培养基配制后应趁热分装。装管时勿使管内外壁沾上溶液，以免浸湿棉塞，污染杂菌。装管后塞上棉塞。棉塞的大小、松紧度应适宜，以用手提棉塞、试管不脱落为准。然后每10

3、支度试管扎成一捆，棉塞上方用牛皮纸包好，避免灭菌时被水蒸汽浸湿。4.灭菌灭菌前将水加至锅内水位标记高度。将试管放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5min，关闭放气阀。当压力表指针指到0.15Kg/cm2时（灭菌所需压强）开始计时，继续维持该压强30min。灭菌结束持压力表指针自然回到”0”位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力表未到”0”位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。5、摆斜面当培养基

4、的温度降到60℃时，将试管斜面放在木棒上，使呈斜面，斜面的长度以占试管长度的1/2为宜。冷却后即成斜面培养基。五、教学方式以分组的形式进行实验、讨论六、考核要求掌握母种培养基的配制比例与高压灭菌方法。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。七、实验的报告要求要求有观察记载数据，完成实验报告与作业。实验二菌种的分离与培养一、本次实验的目的和要求掌握母种转管继代培养技术，了解食用菌制作母种的基本技能。二、实验内容或原理本实验以组织分离为例进行菌种分离与培养，工艺流程：种菇的

5、选择与消毒组织块的切取菌丝培养三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱或超净工作台、解剖刀、牛角勺、棉花、纱布、酒精灯等。试剂：75%酒精、高锰酸钾、富尔马林等。四、实验步骤菌种的分离与培养（本实验以组织分离为例）种菇的选择与消毒选择出菇早，菇形正，菇盖肥厚，具有该品种特征，无病虫害、无杂菌污染，子实体八九分成熟的作为种菇。种菇选定后，用75%酒精进行表面消毒。组织块的切取将斜面培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上，关闭紫外灯后20min后，再开始进入接种室内进

6、行接种。接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染。无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速。用无菌刀在菇柄或菇盖中部纵切一刀，然后用手将菇体掰成两面三刀半，在菌柄和菌盖交界处用刀切取0.3-0.5cm2的小方块组织，将其移接到试管内培养基的中央，将其移接到试管内培养基的中央。菌丝培养接种后置于25℃恒温箱中培养，2-3天后可见组织块周围发生白色绒毛状菌丝，此时每天要检查杂菌污染情况。培养7-10天后，菌丝即可长满斜面。观察记载详细观察比较母

7、种菌丝生长发育动态，计算出平均每天菌丝生长速度。菌落的直径（mm）-菌种块直径（mm）试管内菌丝生长的速度=菌落生长的时间（d）观察母种菌丝的表面形态特征。通过镜检，观察菌丝细胞核的变化规律及锁状联合的形成。五、教学方式以分组的形式进行实验、讨论六、考核要求要求组织分离成功率在50%以上。根据提交的实验报告、实验过程与结果，评分方式为优、良、中、及格、不及格。七、实验的报告要求要求有观察记载数据，完成实验报告。实验三原种与栽培种制作一、本次实验的目的和要求学会原种与栽培种培养基的配制方法，掌握原种与栽

8、培种的接种技术，了解食用菌原种与栽培种制作的工艺流程和制作的基本技能。二、实验内容或原理1.原种与栽培种培养基配制工艺流程：培养基配料→装瓶（或装袋）→灭菌→冷却→接种2.掌握原种与栽培种的接种操作技术接种箱消毒→器械消毒→无菌接种→菌丝培养三、需用的仪器或试剂等仪器：接种箱、高压灭菌锅、750毫升广口瓶、酒精灯、接种勾等。试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉、棉花等。四、实验步骤1.配方本实验以棉籽壳为主料培养基为例。配方为：棉籽壳