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《几种不同提取线粒体的方法对线粒体含量及活性的影响_吴媛》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、2010年4月首都医科大学学报Apr.2010第31卷第2期JournalofCapitalMedicalUniversityVol.31No.2[doi:10.3969/j.issn.1006-7795.2010.02.020]·基础研究·几种不同提取线粒体的方法对线粒体含量及活性的影响1,21,21,2＊3＊吴媛董凌月安威安云庆(1.首都医科大学基础医学院细胞生物学系;2.肝脏保护与再生调节北京市重点实验室;3.首都医科大学基础医学院免疫学系)【摘要】目的比较几种不同的提取线粒体的方法对线粒体蛋白浓度及活性的影响。方法采用蔗糖密度梯
2、度离心法、普利莱试剂盒提取方法和Pierce线粒体提取试剂盒方法分别提取线粒体,测定提取得到的线粒体蛋白浓度、污染情况和活性。结果同样数量的细胞采用普利莱法提取得到的线粒体蛋白浓度高于其他2种方法所提取的线粒体蛋白浓度(P<0.05);采用Westernblotting的方法测定提取的线粒体发现采用普利莱法提取得到的线粒体中胞质蛋白污染较其他2种方法提取得到的线粒体少,线粒体纯度高;测定线粒体中细胞色素C和ATP含量后发现同样采用普利莱法提取得到的线粒体活性最高。结论普利莱法提取线粒体的方法优于蔗糖密度梯度离心法和Pierce线粒体提取
3、试剂盒方法。【关键词】线粒体;线粒体的提取方法;线粒体活性【中图分类号】Q503ComparisonbetweenDifferentMethodstoExtractMitochondriaandItsEffectsonMitochondriaContentandActivity1,21,21,2＊3＊WUYuan,DONGLing-yue,ANWei,ANYun-qing(1.DepartmentofCellBiology,SchoolofBasicMedicalSciences,CapitalMedicalUniversity;2.M
4、unicipalLaboratoryforLiverProtectionandRegulationofRegeneration;3.DepartmentofImmunology,SchoolofBasicMedicalSciences,CapitalMedicalUniversity)【ABSTRACT】ObjectiveTocomparedifferentmethodsforextractingmitochondriaanditseffectsonmitochondriacontentandtheiractivity.MethodsP
5、ulilaikit,sucrosegradientcentrifugationandPiercemitochondriaextractionkitwereusedtoextractmitochondriaandquantifytheirconcentration,activityandcontamination.ResultsPulilaikityieldedhigherconcentrationofmitochondriaproteinsthantwoothermethods(P<0.05)whenthesameamountofcel
6、lswereused.Westernblottingwasusedtoevaluatetheamountofcytosolicproteincontaminantandmitochondriaproteincytochromecfrommitochondriafraction.TheresultsuggeststhatusingPulilaikitcanyieldlowerconcentrationcytosolicproteincontaminantandhigherconcentrationofcytochromecfrommito
7、chondriafractionthantheothertwomethods.Atthesametime,ATPcontentofmitochondriaextractedbythemethodofPulilaikitwasthegreatest.ConclusionPulilaikitisbetterthansucrosegradientcentrifugationandPiercemitochondriaextractionkitformitochondriaextraction.【KEYWORDS】mitochondria;mit
8、ochondrialextraction;mitochondrialactivity线粒体是细胞中重要的一种细胞器,存在于绝大及细胞中提取。多数活细胞中,它的主要功能是提供细胞内各种物质[13]1材料和方法
