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1、首都医科大学学报2010年4月 Apr.2010第31卷 第2期 JournalofCapitalMedicalUniversityVol.31 No.2[doi:10.3969/j.issn.100627795.2010.02.020]·基础研究·几种不同提取线粒体的方法对线粒体含量及活性的影响1,2 董凌月1,2 安 威1,23 安云庆吴 媛33(1.首都医科大学基础医学院细胞生物学系;2.肝脏保护与再生调节北京市重点实验室;3.首都医科大学基础医学院免疫学系)【摘要】 目的 比较几种不同的提取线粒体的方法对线粒体蛋白
2、浓度及活性的影响。方法 采用蔗糖密度梯度离心法、普利莱试剂盒提取方法和Pierce线粒体提取试剂盒方法分别提取线粒体,测定提取得到的线粒体蛋白浓度、污染情况和活性。结果同 样数量的细胞采用普利莱法提取得到的线粒体蛋白浓度高于其他2种方法所提取的线粒体蛋白浓度(P<0.05);采用Westernblotting的方法测定提取的线粒体发现采用普利莱法提取得到的线粒体中胞质蛋白污染较其他2种方法提取得到的线粒体少,线粒体纯度高;测定线粒体中细胞色素C和ATP含量后发现同样采用普利莱法提取得到的线粒体活性最高。结论 普利莱法提取线粒体的方法优于蔗糖密
3、度梯度离心法和Pierce线粒体提取试剂盒方法。【关键词】 线粒体;线粒体的提取方法;线粒体活性【中图分类号】 Q503ComparisonbetweenDifferentMethodstoExtractMitochondriaandItsEffectsonMitochondriaContentandActivityWUYuan1,2,DONGLing2yue1,2,ANWei1,23,ANYun2qing33(1.DepartmentofCellBiology,SchoolofBasicMedicalSciences,CapitalMedi
4、calUniversity;2.MunicipalLaboratoryforLiverProtectionandRegulationofRegeneration;3.DepartmentofImmunology,SchoolofBasicMedicalSciences,CapitalMedicalUniversity)【ABSTRACT】 Objective Tocomparedifferentmethodsforextractingmitochondriaanditseffectsonmitochondriacontentandtheira
5、ctivity.Methods Pulilaikit,sucrosegradientcentrifugationandPiercemitochondriaextractionkitwereusedtoextractmitochondriaandquantifytheirconcentration,activityandcontamination.Results Pulilaikityieldedhigherconcentrationofmitochondriaproteinsthantwoothermethods(P<0.05)whenthe
6、sameamountofcellswereused.Westernblottingwasusedtoevaluatetheamountofcytosolicproteincontaminantandmitochondriaproteincytochromecfrommitochondriafraction.TheresultsuggeststhatusingPulilaikitcanyieldlowerconcentrationcytosolicproteincontaminantandhigherconcentrationofcytochr
7、omecfrommitochondriafractionthantheothertwomethods.Atthesametime,ATPcontentofmitochondriaextractedbythemethodofPulilaikitwasthegreatest.Conclusion PulilaikitisbetterthansucrosegradientcentrifugationandPiercemitochondriaextractionkitformitochondriaextraction.【KEYWORDS】 mitoc
8、hondria;mitochondrialextraction;mitochondrialactivity 线粒体是细胞中重要的一种细胞器,存在于绝大及细胞中提取
