(精选)沙门菌检查

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1、1.简沙门屈是肠杆菌科的重要致病菌，药品中的沙门菌，是以鉴定沙门菌屈为准，即对每10g（或10ml）药品中是否检岀沙门菌作岀检验报告。由于药品在生产过程屮，常受到加热、干燥等加工步骤的影响，药品屮污染的沙门菌受到损伤或呈休眠状态，故须在增菌培养前先进行预增菌。然后再进行增菌及分离、三糖铁琼脂初步鉴别、生化试验、血清学试验等步骤。2.仪器、设备及用具（参见大肠埃希菌2）。3.试液、指示液（参见大肠埃希菌3）。3.1无菌腺试液。3.2酚磺瞅指示液。3.3亮绿试液。3.4氤化钾试液3.5混甲酚紫指示液3.6革兰染色液4.培

2、养基4」营养琼脂培养基。4.2营养肉汤培养基。4.3半固体营养琼脂培养基。4.4曙红亚叩蓝琼脂培养基（EMB）。4.5麦康凯琼脂培养基（MacC）。4.6四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）。4.7三糖铁琼脂培养基（TSI）。4.8胆盐硫乳琼脂培养基（DHL）o4.9沙门菌屈志贺菌屈琼脂培养基（SS）o4.10蛋白Jj东水培养基。4.11腺（尿素）琼脂培养基。4.12M化钾培养基。4.13赖氨酸脱竣酶培养基。5.对照用菌液取乙型副伤寒沙门菌［CMCC(B)50094］的营养琼脂斜面培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基内，

3、36°C±1°C培养18〜24h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1:106(浓度相当于50〜lOOcfu/O.lml),作阳性对照用菌液。其菌液浓度可用平板菌落计数法测得。即取O.lml加入平川L内，倾注营养琼脂，混匀，或以0.1ml均匀涂布于事先准备好的营养琼脂平板上，经培养后点计求得。2.操作方法6.1准备工作：(见细菌、霉菌和酵母菌计数6)。6.2供试液的制备：(见细菌、霉菌和酵母菌计数7)。6.3阳性对照试验、阴性对照试验(见大肠埃希菌7.1)。6.4增菌培养641预增菌取营养肉汤培养基2份，每份200ml

4、,1份加入10g或者10ml供试品混匀，另1份加入稀释剂10ml作阴性对照，36°C±1°C培养18〜24h,观察。摇动阴性对照瓶后应清亮透明，无菌生长。6.4.2增菌培养轻微摇动供试品增菌培养瓶，吸取1ml接种于1管含10ml四硫磺酸钠亮绿培养基的试管中，培养18〜24h。6.5分离培养轻微摇动供试品增菌培养瓶，以接种环沾取1〜2环培养液划线于胆盐硫乳琼脂(DHL)或沙门菌志贺菌琼脂(SS)平板及曙红亚甲蓝(EMB)琼脂或麦康凯琼脂平板各1个，倒置培养24〜48h,必要时延长至40〜48h。检查平板上有无疑似沙门菌

5、菌落。沙门菌在上述平板上的菌落形态见下表沙门菌的菌落特征培养基菌落形态胆盐硫乳琼脂(DHL)无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色。沙门菌属志贺菌属琼脂(SS)无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有吋带黑褐色。曙红亚甲蓝琼脂(EMB)无色至浅橙色，半透明或透明，光滑湿润的圆形菌落。麦康凯琼脂(MacC)无色至浅橙色，半透明或透明，菌落屮心有时为暗色。6.6初步鉴别试验从每个供试品的分离平板上挑取2〜3个疑似菌落分别接种于三粮铁琼脂斜面，接种时应以接针轻轻接触单个菌落屮心部位，沾取培养物划线于三糖铁琼

6、脂斜面并穿刺到底层或先穿刺底层再划线斜面，培养18〜24h,观察结果。疑似沙门菌在三糖铁琼脂斜面上的反应为：（1）斜面红色（产碱），底层黑色（产H2S）并显示黄色（产酸）。（2）斜面红色，底层黄色。（3）斜面黄色，底层黑色，并显示黄色。多数沙门菌在三糖铁琼脂上产生气体，使底层琼脂出现气泡或使琼脂断裂，但也有不产生气体的菌种。对在三糖铁琼脂斜面黄色并同时底层无黑色，或斜面及底层均为红色者可以排除沙门菌。将疑似沙门菌的三糖铁琼脂或营养琼脂斜面培养物作生化试验，血清凝集试验及革兰染色，镜检。沙门菌应为革兰阴性杆菌。6.7生

7、化试验6.7」靛基质试验用接种坏沾取少许培养物，接种于蛋门腺水培养基中，照大肠埃希菌靛基质试验项下操作、判断结果。沙门菌应为阴性反应。6.7.2W酶试验用接种坏沾取少许培养物，划线接种于腺琼脂斜面，培养24h,观察结果。斜面变为红色为阳性反应，沙门菌属为阴性反应。6.7.3M化钾试验将培养物先接种至营养肉汤培养基中培养20〜24h,用接种环沾取培养液一坏，接种至氧化钾培养基内，另取一坏培养液接种于不含氤化钾的同样培养基内作对照管，接种后即以橡胶塞塞紧，培养24〜48h,观察结果。对照管内有菌生长（混浊），而试验管也有

8、菌生长为阳性反应；对照管有菌生长（混浊）而试验管无菌生长（清亮）为阴性反应。沙门菌应为阴性反应。6.7.4赖氨酸脱竣酶试验用接种坏沾取少许培养物，接种在赖氨酸脱竣酶培养基中，同时接种一支不含赖氨酸的同样培养基作为对照管，培养24〜48h观察结果。对照管黄色（产酸），试验管呈紫色为阳性反应（赖氨酸脱竣产碱）；试验管黄色为阴性反应。沙门菌应为阳性反