沙门菌临床检验分析

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1、沙门菌临床检验分析刘丽萍(双鸭山煤炭总医院黑龙江双鸭山155100)【中图分类号】R378.2+2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)04-0064-03沙门菌属广泛分布于自然界，通常寄居于人或动物肠道内是肠杆菌科的重要致病菌属，可使人和动物致病。它由6个亚属组成，即I、II、III、IV、V、VI和III；己发现的沙门菌有2000多个菌型。沙门菌是一大群形态、培养特性、牛化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。沙门菌检验和鉴定较为复杂，一般分为前增菌、选择性增菌、分离培养、牛化鉴定和血清学分型5个步骤进行。一样木釆集根据疾病的类型、病情和病程的不同釆取不同的样木。1

2、.血液或骨髓液肠热症病人，在病程的第1〜2周内采集静脉血，在1〜3周内不采集骨髓液。2.粪便和尿液肠热症病人在病程的第二周以后；胃肠炎病人在急性期、早期采集新鲜粪便，最好在用药前采集；带菌者可用肓肠拭了采集肓肠表面粘膜。在病稈的第二周，肠热症病人亦可采集中断尿或无菌导尿，经3000r/min离心沉淀后供检验用。3.呕吐物或食物等疑为沙门菌食物中毒的病人，除采集粪便外，还应釆集呕吐物和可疑食物样木，新鲜肉类用无菌剪刀釆取，于无菌器皿内送检。4.其他样木(1)如胆汁、脑脊液、胸水、腹水等经离心沉淀后供用；用拭子采集中耳分泌物、渗出液、脓液、咽喉、阴道等液。(2)健康相关产品，可采集各类食品、

3、化妆品、卫牛用品和药品等。二培养基和试剂（1）所用培养基和配制缓冲蛋白腺水（BP）：氯化镁孔雀绿（MM）增菌液；四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸钮琼脂（BS）；胆盐硫乳（DHL）琼脂;HE琼脂;WS琼脂;SS琼脂三糖铁（TSI）琼脂；蛋白腺水、靛基质试剂；尿素琼脂（PH7.2）；氧化钾（KCN）培养基；氨基酸脱竣酶试验培养基；糖发酵管；“2.3.25；ONPG培养基；半固体琼脂；丙二酸盐培养基“2320”。（2）沙门菌因子血清按照26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163种用于详细分型进行选用。检验步骤（以食品中沙门菌检验为例）1・前增菌和增菌冻肉

4、、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。称取检样25g加入盛有225ml缓冲蛋白月东水的500ml广口瓶内。固体食品可先以匀质器于8000r/min打碎lmin,或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化，在36°C±l°C培养4h（干蛋品培养18~24h）,移取10ml转种于100ml氯化镁孔绿肉汤增菌液内，42°C下培养18〜24h。同时另取10ml,转种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，36°C±l°C下培养18〜24h。鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品无需经过前增菌。取检样25g（或25ml）加入灭菌生理盐水25ml,按前法制成检样

5、匀液；取25ml接种于100ml氯化镁孔淮绿增菌液或四硫磺酸钠粕绿增菌液内，在42°C下培养24h；另取25ml接种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，36°C±；rC下培养18〜24h。2•分离培养取增菌液1环，画线接种于一个亚硫酸饿琼脂平板和一个DHL琼脂平板（或HE、WS、SS）或40〜48h（BS）,观察各平板上生长的菌落,沙门菌1、II、III、IV、V、VI和沙门菌III在各平板上的菌落特征。3•生化反应（1）从选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种TSI琼脂。在TSI琼脂内，肠杆菌科属种的反应结果。在TSI琼脂内只有斜面产酸又同时硫化氢（H2S）阴性的菌

6、株可以排除，其他的反应结果均有沙门菌的可能，但同时也均有不是沙门菌的可能。（2）在接种TSI琼脂抽吋，再接种蛋白腺水（作靛基质试验用）、尿素琼脂（pH7.2）、KCN培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各1管，在36°C±l°C培养18〜24h,必要吋可延长至48h,按判定结果。按反应序号分类，沙门菌属的果应属于Al、A2和B1,其他5种反应结果均可以排除。若有以下情况应做补充试验：1）反应序号A1为典型反应者，判定为沙门菌属。若尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常，按照可判定为沙门菌。若有2项异常，则按照A3判定为弗劳地枸椽酸杆菌。2）反应序号A2应补做甘露醇和山梨

7、醇试验，判定结果。3）反应序号B1应补做ONPG°ONPG+为大肠埃希菌，ONPG为沙门菌。同时沙门菌应为赖氨酸（+）,但甲型副伤寒沙菌为赖氨酸（一）。4）有必要时，进行沙门菌生化群的鉴别。4.血清学分型鉴定（1）抗原准备一般采用1.5%琼脂斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。当0血清不凝集吋，将菌株接种于含琼脂量较高的（2.5%〜3.5%）培养基上进行检查；若是因Vi抗的存在而阻止了0凝集反应吋，可挑取菌苔于lml生理盐水中作成浓