色谱柱应用问题排查及使用维护

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1、色谱应用问题排查与柱使用维护沃特世消耗品部liuliu_wu@waters.com©2011WatersCorporationAgenda新柱和/或项目开始之前……？色谱柱刚使用就出现问题……！色谱柱的维护与保养……？©2011WatersCorporation2Agenda新柱和/或项目开始之前—了解你的色谱柱—色谱柱的安装—测试色谱柱的柱效色谱柱刚就出现问题……！色谱柱的维护与保养……？©2011WatersCorporation3了解你的色谱柱：色谱柱维护使用指南书填装良好的色谱柱在系统、连接状况皆良好的状况下，色谱峰形很好©2011WatersCorp

2、oration色谱柱的安装色谱柱：—色谱柱封存时，应使用合适匹配的柱封堵头—如柱封堵头不匹配或未拧紧，可能导致溶剂部分挥发，柱床部分干涸好的操作习惯：—总是从纯有机溶剂、低流速开始（避免对柱压力骤然升高）—仅连接柱入口端、纯有机溶剂、低流速：检查是否存在柱干涸情况—如存在柱干涸：充分排除柱内气泡，避免进入检测器—如存在柱干涸：继续用纯有机溶剂、低流速浸润柱©2011WatersCorporation5柱安装的正确操作©2011WatersCorporation6新项目开始前，进行柱效检测的必要性确认色谱柱和仪器状态良好©2011WatersCorporation7测试

3、色谱柱的柱效不测试柱效的“后果”：-如柱效不佳，将浪费对实际样品的分析测试时间、问题排查时间，甚至宝贵样品；-所得数据：无效，并将难以重现；-对于新柱，如柱效不佳，难以判断是否是样品或流动相污染所造成；-建议新柱在到货后，即进行柱效测试，如有疑问，及时与供应商联系排查。©2011WatersCorporation8影响色谱柱柱效表达的系统因素影响柱效的系统因素：-系统死体积，包括系统中过长冗余的管路、或管路内径过大不合适，等等；（摘自SunFire维护使用说明书）-不合适的管路与柱的连接；-检测器采样频率过低。（摘自Xbridge维护使用说明书）©2011WatersCo

4、rporation9新柱柱效测定结果系统对柱效的影响塔板数是反映色谱柱以及仪器性能状态的关键参数相同色谱柱AB12,0007,000仪器A：仪器B：谱带展宽较小（70µL）谱带展宽较大（130µL）测出的塔板数较高（12,000）测出的塔板数较低（7,000）©2011WatersCorporation『实例』某药企仪器型号：岛津LC-2010-CHTPropiophenone苯丙酮(中性)色谱柱：XBridgePhenyl3.5um4.6*100mmPropiophenone苯丙酮(中性)USPtemplate:5856Tailing:1.27©2011WatersCo

5、rporation11柱效测试COAUSPtemplate:12679Tailing:1.12©2011WatersCorporation12更换仪器后仪器型号：Waters2695Propiophenone苯丙酮(中性)色谱柱：XBridgePhenyl3.5um4.6*100mmUSPtemplate:11000Propiophenone苯丙酮(中性)©2011WatersCorporation13谱带展宽vs系统死体积死体积谱带展宽©2011WatersCorporation14谱带展宽vs死体积死体积谱带展宽ControlsbandspreadingImpor

6、tantfortransferringmethodsAffectsallpeaks—SystemshavedifferentvolumesAllowssmallIDcolumnstobeusedAffectsearlyelutingpeaksRelatestopeakwidthandDiffersinhighandlowefficiencypressuremixingRelatestoruntimeandgradientformation©2011WatersCorporation15实例：管线内径对柱效的影响—在色谱柱与进样器之间使用不同内径的管线上图是用0

7、.009″内径的管路连接时测柱效的色谱图：柱效：1,1000下图是用0.04″内径的管路连接时测柱效的色谱图：柱效：4000注：使用相同色谱柱©2011WatersCorporation实例：管线内径对柱效的影响连接管线的内径对系统谱带展宽的影响0.009"0.040"0.020"注：过长的管线亦会造成较大的谱带展宽样品谱带在管线内发生了扩散©2011WatersCorporation色谱柱安装及连接的机械因素-连接连接适当连接不妥，造成漏液连接不妥谱带展宽由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽，机械问题©2011WatersC