液相色谱柱的使用与维护

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1、液相色谱柱的使用与维护WatersCBUMarketing王欣玲Xinling_wang@waters.com©2015WatersCorporation1目录正确使用_柱效测试_色谱柱的平衡_色谱柱的清洗_色谱柱的保护_色谱柱的保存色谱柱常见故障_柱效下降_基线问题_保留时间改变_峰型问题©2015WatersCorporation2目录正确使用_柱效测试_色谱柱的平衡_色谱柱的清洗_色谱柱的保护_色谱柱的保存色谱柱常见故障_柱效下降_基线问题_保留时间改变_峰型问题©2015WatersCorporation3了解你的色谱柱：色谱柱维护使用指南书(网站下载)

2、填装良好的色谱柱在系统、连接状况皆良好的状况下，色谱峰形很好©2015WatersCorporation4色谱柱的安装色谱柱可能已经发生：–溶剂部分挥发，柱床部分干涸–常用C18柱发生干涸时：如果操作正确，可将柱恢复至应有柱效好的操作习惯：–仅连接柱入口端、纯有机溶剂、低流速：检查是否存在柱干涸情况–如存在柱干涸：充分排除柱内气泡，避免进入检测器–如存在柱干涸：继续用纯有机溶剂、低流速浸润柱，避免柱压骤升©2015WatersCorporation5色谱柱的安装HPLC柱，粒径5um，内径4.6mm时：UPLC柱，1.7或1.8um，内径2.1mm时：（UPLC柱体

3、积小，更容易发生溶剂挥发柱床干涸的问题）??©2015WatersCorporation6测试色谱柱的柱效不测试柱效的“后果”：-如柱效不佳，将浪费对实际样品的分析测试时间、问题排查时间，甚至宝贵样品；-对于新柱，如柱效不佳，难以判断是否是样品或流动相污染所造成；-建议新柱在到货后，即进行柱效测试，如有疑问，及时与供应商联系排查。©2015WatersCorporation7影响色谱柱柱效表达的系统因素影响柱效的系统因素：-系统死体积，包括系统中过长（摘自SunFire维护使用说明书）冗余的管路、或管路内径过大不合适，等等；-不合适的管路与柱的连接；-检测器采样频率过低

4、。（摘自ACQUITYUPLC维护使用说明书）©2015WatersCorporation8新柱柱效测定结果系统对柱效的影响塔板数是反映色谱柱以及仪器性能状态的关键参数相同色谱柱AB12,0007,000仪器A：仪器B：谱带展宽较小（70µL）谱带展宽较大（130µL）测出的塔板数较高（12,000）测出的塔板数较低（7,000）©2015WatersCorporation9柱外谱带展宽的机械因素进样体积注意：谱带最早由进样器产生进样器（密封垫问题）}连接管线，特别是：–进样器至色谱柱注意：这是最常见的问题–色谱柱至检测器接头及筛板检测器的检测池体积色谱柱本

5、身–色谱柱内的死体积–筛板阻塞©2015WatersCorporation10实例：管线内径对柱效的影响—在色谱柱与进样器之间使用不同内径的管线上图是用0.009″内径的管路连接时测柱效的色谱图：柱效：1,1000下图是用0.04″内径的管路连接时测柱效的色谱图：柱效：4000注：使用相同色谱柱©2015WatersCorporation11实例：管线内径对柱效的影响连接管线的内径对系统谱带展宽的影响0.009"0.040"0.020"注：过长的管线亦会造成较大的谱带展宽样品谱带在管线内发生了扩散©2015WatersCorporation12色谱柱安装及连接的机械

6、因素-连接连接适当连接不妥，造成漏液连接不妥谱带展宽由于色谱柱连接不当引起的谱带展宽，机械问题©2015WatersCorporation13测试柱效一、了解色谱柱之前的情况并判断色谱柱是否正常二、将检测结果小心保存，当实验过程中发现异常时，再检测柱效进行对比，来进一步排查原因三、按照色谱柱检测报告方法测试色谱柱，由于色谱系统有差异，您的测试结果可能与色谱柱厂家实验室得到的结果有所差异，一般来说，变化小于20%可归因于仪器的不同四、理论塔板数可使用下面的公式估算：N=3500L/dpL代表柱长，单位是cm；dp代表填料粒径，单位是µm。新拿到一根色谱柱开始实验前，要先测

7、试柱效©2015WatersCorporation14正确使用色谱柱-总述样品方面了解样品在流动相中的溶解度，用流动相试样品的溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用流动相方面过滤脱气纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低缓冲液的pH值必须在填料的允许范围内缓冲液（盐）的浓度用色谱纯溶剂，并与填料相匹配溶剂中的杂质含量©2015WatersCorporation15色谱柱平衡/反相色谱柱©2015WatersCorporation16离子对试剂的使用使用离子对流动相的色谱柱–明显需要较长的平衡