资生堂色谱柱使用及维护

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1、1/18资生堂HPLC色谱柱使用及维护资生堂色谱知识讲座先端科学事业推进部技术中心资生堂（中国）投资有限公司北京经济技术开发区景园北街2号BDA国际企业大道31号(100176)TEL：010-67856801FAX：010-67856882http://hplc.shiseidochina.com/2/18资生堂色谱网站http://hplc.shiseidochina.com/色谱柱使用说明书3/18色谱柱的冲洗、保存、故障和对策4/18色谱柱的安装和连接安装色谱柱之前，建议先冲洗设备，并观察系统压力，确保系统各处连接正常

2、通常，使用不含盐的流动相进行冲洗。如果担心系统中残存盐溶液，为避免盐析，请先使用高水相冲洗后，再置换成不含盐的流动相；请按照色谱柱标签上的箭头方向来安装色谱柱（左图）。确保配管接头连接正确，并且锥箍的顶端已插入接头内侧(下图)；安装后，使用不含盐的流动相置换色谱柱保存液后，再用流动相平衡系统和色谱柱。如果担心色谱柱保存液含有盐，请先使用高水相冲洗。5/18色谱柱使用注意事项避免强烈撞击，以防色谱柱劣化；请在压力指示为0时进行色谱柱的安装和拆卸；请在色谱柱正常压力范围15MPa(IF为40MPa)内使用；流动相pH不要超过色谱柱

3、pH使用范围，不要发生大幅度变化，否则容易劣化；资生堂C18柱pH2-10（ACR柱pH1-10）,SCX柱pH2-7,NH2柱pH2-8为防止由异物导致的色谱柱入口处过滤筛板堵塞，建议使用线上过滤器；柱温越高，越易劣化；更换流动相时请注意不要盐析。6/18离子交换柱使用注意事项不要使用100%水冲洗色谱柱；流动相一般为含盐水溶液和有机溶剂，在配制流动相及更换色谱柱时一定注意不要发生盐析；新SCX柱使用纯乙腈封存，若要置换成含无机盐的流动相，请确保不要发生盐析；要严格控制流动相pH在使用范围之内SCX柱pH2-7，NH2柱pH

4、2-8；色谱柱平衡时间长NH2柱在水/乙腈系下分析糖类物质时，需要平衡4～5小时；SCX、NH2柱使用含缓冲盐流动相时，最好需要平衡过夜。7/18Melamine结构式平衡60min后次日HPLCConditions:Column:SCXUG805μm,4.6mmi.d.×150mmM.Phase:50mMKH2PO4(pH3.0adjustedwithH3PO4)/CH3CN=70/30Flowrate:1mL/minOvenTemp.:30°CDetector:UV240nmSample:MelamineinM.P.Inj

5、.Vol.:20μL使用SCX柱三聚氰胺的分析平衡2h以上，保留时间稳定8/18色谱柱的冲洗什么情况下需要冲洗色谱柱？柱压升高色谱峰形异常在强碱性和TFA等强酸条件下使用之后注意：一般情况下不建议对色谱柱进行冲洗，不冲洗反而更能延长色谱柱的寿命。9/18反相系色谱柱该如何冲洗？可以用水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次冲洗，或者用H2O:CH3CN=1:1或H2O:CH3OH=1:1进行长时间冲洗。在乙腈甲醇冲洗过程中，可以重复注射100-200μL四氢呋喃或异丙醇都可以有助于除去强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈和甲醇的混合物能

6、除去类脂。用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脱能除去蛋白质污染。10/18正相系色谱柱该如何冲洗？一般情况下100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉，可直接使用其冲洗色谱柱更换溶剂时注意溶剂间的互溶情况，尤其是水会较大干扰正相检测11/18离子交换色谱柱的冲洗阳离子色谱柱：酸性缓冲盐溶液冲洗阴离子色谱柱：稀碱缓冲液冲洗NH2色谱柱：80%CH3CN(pH11、氨水)冲洗NH2柱1～2小时，使在酸性条件下产生的质子化氨基回到初始状态除去用于离子交换的盐后，可以用水、甲醇、乙腈、二氯甲烷等冲洗12/

7、18常规反相色谱柱保存方法使用间隔为1～2日，请降低流速并连续通液；短期保存（数周）时，不需要冲洗流动相，拧紧并放好。但使用了强酸强碱流动相时，请使用含有相同有机溶剂组成的中性流动相置换保存；长期保存（数月）时，请将流动相置换为含50%以上有机溶剂的溶液；更久保存（1年左右）时，请使用100%乙腈保存；色谱柱的保存13/18色谱柱的保存NH2一个月以内的保存，请使用与所选用流动相组成相同的有机溶剂和水的混合溶液（不含酸、无机盐）进行置换，请避免只用水进行置换；一个月以上的长期保存，在进行了上述处理之后，请用出厂时的溶剂（乙腈）

8、置换并保存；SCX短期保存时，请使用含盐的水系流动相来保存。长期保存时，请用出厂流动相纯乙腈来保存。PCHILIC分别使用水/乙腈=85/15及水/乙腈=10/90在通常流速下各冲洗约1小时，在色谱柱内为水/乙腈=10/90的状态下进行保存；糖分析色谱柱SUCREBEAD将流