色谱柱的原理、应用及维护

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1、论坛在线技术讲座《色谱柱的原理、应用及维护》色谱柱的原理、应用及维护——中国色谱网在线技术讲座活动主办：中国色谱网（www.sepu.net）活动协办：迪马科技（www.dikma.com.cn）主讲人：diamonsil-girl（迪马技术工程师）主讲内容：第一部分：如何选择适合的色谱柱·根据分离规模确定色谱柱大致的规格⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P1-1·从分析物的物理化学性质入手，找出大致的色谱柱类型⋯⋯P1-2·对填料的要求⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P2-3·色谱柱规格⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P3-3·其他特

2、殊要求（实例分析）⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P3-5第二部分色谱柱的正确使用、维护及保养方法与技巧·正确使用和故障判断⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P6-6·维护和保养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P6-7·色谱柱的再生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P8-8第三部分钻石二代色谱柱的性能及特点·技术参数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P9-9·色谱柱的技术特点及优势（色谱柱的应用）⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯P9-17活动主办：中国色谱网协办：迪马科技活动联系：0571-28905296论坛在线技术讲座《色谱柱的原理

3、、应用及维护》一、如何选择适合的色谱柱1、根据分离规模确定色谱柱大致的规格表1按分离规模分类的高效液相色谱柱类别柱径/mm备注生产型制备柱直径可达几十制备柱>10厘米半制备柱5～10分析柱2～5典型柱为Φ4.6或Φ4mm一般柱管可为金属亦可为塑细径柱0.8～2.0料制，如PEEK制微型柱毛细管柱可为填充柱亦可为毛细管柱0.05～0.5开管柱纳米柱<0.1填充柱或开管柱2、从分析物的物理化学性质入手，找出大致的色谱柱类型选柱前应详细掌握分析物的分子量（或分子量范围）、溶解性、是否解离等信息，然后根据这些性质找到合适的色谱柱类型。表2液相色谱分

4、离模式的选择样品相对分子溶解性分离模式色谱柱备注量小于溶于正己正相吸附色填料孔径通Silica2000烷谱常为100Å溶于四氢GPC呋喃脂溶性正相键合色氰基柱、氨基柱溶于甲醇/谱水C18、C8、PH或PLRP(反反相色谱相聚合物色谱柱)水溶性非离子型反相色谱C18、C8、PH或PLRP离子抑制色C18、C8、PH或PLRP谱离子型离子对色谱C18、C8、PH或PLRP离子交换色AX、CX谱活动主办：中国色谱网协办：迪马科技活动联系：0571-28905296论坛在线技术讲座《色谱柱的原理、应用及维护》低聚肽、蛋反相色谱C18、C8、C4或P

5、LRP白质脂溶性GPCGFC大于填料孔径通多肽、蛋白2000水溶性反相色谱C18、C8、C4或PLRP常为300Å质离子型离子交换AX、CX几点特殊说明：(1)反相色谱柱可以对非极性、弱极性、中等极性以及部分强极性化合物进行分离，是应用最广的色谱柱；反相色谱柱以“分配作用”保留分析物，主要以分析物在两相中的溶解性进行选择，有时不能对同分异构体和结构类似物进行分离；(2)部分解离性较弱的化合物，可通过向流动相加入酸、碱、盐的形式使分子以某种稳定并且保留性强的形式存在，然后用反相柱进行分析，这种分析方法包括“离子抑制色谱”和“离子对色谱”；(3

6、)在反相分析中，C18柱是首选色谱柱，如果保留太强，可换成C8进行分析，以节约分析时间；(4)PLRP是以聚苯乙烯-二乙烯基苯为填料的色谱柱，为反相柱，疏水性与C18相近，但不具有次级相互作用，分析碱性化合物时不会发生拖尾。(5)包括Silica、氨基柱、氰基柱在内的正相色谱柱，分别通过硅羟基、胺基、氰基与分析物中的极性基团发生极性相互作用，从而实现对分析物的保留和分离，适用于极性化合物的分离，对许多同分异构体和结构类似物也能实现较好分离。3、对填料的要求1）填料类型普通的硅胶键合相色谱柱在流动相pH处于2～7.5范围时表现稳定，超出这一范

7、围就会发生键合相水解(pH<2)或硅胶溶解(pH>7.5)等现象，因而具体到那一款色谱柱的选择时，应保证填料所能耐受的pH范围符合分析条件的要求。色谱耗材制造公司通过改进键合技术，已经制造出pH适用范围较宽的硅胶键合相色谱柱，比如Diamonsil(2)能够耐受1.5～9的pH值，可以满足绝大多数情况下的反相色谱分析。PLRP为聚合物基质的反相填料，由于不存在上述水解和溶解的危险，因而能够在各种pH值下使用，是目前pH值适用范围最宽的色谱柱，其主要缺点是柱效较低，重现性差和在有机相中的溶胀性质等。2）填料粒径目前分析中大多使用粒径为1.7～

8、5μm的填料。根据速率理论，塔板高度与填料的粒径近似成正比，因而减小填料粒径可以得到更高的柱效，当分离效果不理想时可以考虑使用更细的填料；使用细粒径填料时，柱长可适当缩短，以提高