致倦库蚊抗药性监测实验研究可行性研究报告

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1、南昌市致倦库蚊抗药性监测实验研究可行性报告付仁龙陈海婴一、选题的必要性媒介牛物性疾病多为传染性疾病，在我国37种法定传染病中，有12种为媒介生物性疾病，在传播这些疾病的众多病媒生物一即媒介生物中，蚊虫是与人类接触最为密切的昆虫之一，蚊虫的吸血特性，是其传播疾病的基础，它能传播疟疾、登革热、丝虫病、流行性乙型脑炎、西尼罗病毒病等，严重危害人们的健康和牛命。致倦库蚊｛Cuiexpipiensquinquefasciatus))''布于热带和亚热带，也是我国北纬32°-34°以南地区最常见的屈家蚊种，是斑氏丝虫病(FilariasisBancrofti)和乙型脑炎(Japaneseencephali

2、tis)的重要媒介。在媒介生物的综合治理策略中，化学防制由于具有快速、高效、经济、简便等特点，而作为一种主要的防治措施被采用。但是，大量使用有机合成药物就会使媒介昆虫对其产生抗药性。在对致倦库蚊进行防治前需要调查其抗约性水平，以决定药物的使用种类及浓度。常用生物学测试抗性方法是以生物测定法即以药物对防治种群的毒力测定结果为依拯，以半数致死浓度(LC50)或半数致死剂量(LD50)为标准来判断群休抗药力。这种方法工作量大，不确定因素也多，并且不能表示何种程度为抗性；而酯酶活性检测法操作较为简单，可对单个蚊虫测定，从而打开了检测个体抗药力的途径，在蚊虫抗药性上是一个极重要的进展。70年代末，Saw

3、cki创制检测昆虫个体酯酶强度的方法，1981年Georghiou改进为滤纸片法检测，专测蚊虫酯酶，其原理和以往的比色法完全相同，且更为简单易于推广。后经多次改进，使得检测可以得到一个数据而不是肉眼的印象，结果较为准确，但询难以取代传统的生物测试法。拟除虫菊酯作为世界上应用仅次于有机磷杀虫剂的一类杀虫剂,其抗药性业已发展为FI趋严重的公共一卫生问题。现在普遍认为昆虫对拟除虫菊酯类抗药性的产生是由于昆虫神经轴突钠离子通道(sodiumchannel,SC)的基因发生突变而导致击倒抗性(knockdownresistance,kdr),使得生物测试法和生化测试法均不能检测拟除虫菊酯类抗性，因而急需

4、一种快速、简单、准确的抗性检测方法。通过PCR检测kdr却具有以下优点：⑴能够检测岀杂合子(heterozygote),故可在早期发现抗性基因，有利于抗性控制(2)能够准确检测单只昆虫的抗药性，所需样本含量小、省时乂省力。1998年，Martize-Torres^人根据冈比亚按蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂产生的击倒抗性(Kdr)基因突变设计出特异引物，以按蚊的基因组D7A为模板进行PCR扩增，根据是否扩增岀特异片段来判断有无抗性产生，通过监测蚊虫的抗性基因型以达到抗性监测的冃的，获得了成功，国内江毅民等也通过该法作了对家蝇拟除虫菊酯抗药性的分了生物学监测，但尚未有用來见监测蚊虫抗性的报道。研究和应用

5、先进的抗性监测技术如生物化学与分了生物学方法，建立和规范检测标准，可提高抗性检测的速度和准确率。尤其在媒介生物的防制过程中，快捷而准确的抗性监测有助于制定科学合理的综合治理策略，指导用药，延长卫生杀虫剂有效使用寿命，减少环境污染，同时也可更好地为我市的除四害工作及创建国家卫生城市目标服务，特选择此课题的研究。二、技术方案论述1.项目技术关键点或创新点论述：(1)本项目以致倦库蚊作试虫，从分子水平上探讨拟除虫菊酯在钠通道上受体位点，不仅有利于进一步获得通道的一些结构特征，为昆虫钠通道的一级结构特征的阐明奠定基础，

6、仏且冇利于阐明拟除虫菊酯可能的分子水平作用机理，从而可能设计出新的高效的杀虫剂分子

7、。该内容国内外均未见文献报道(屈原创性研究)，该研究对新型杀虫剂的探索将具有重要的理论意义。(2)首次将抗性品系和降解品系致倦库蚊kdr进行比较，试图探索kdr的减弱或消除规律，为设计合理的抗性治理方案捉供依据，为抗性蚊种的综合防制奠定理论基础。(3)国内首次将生物测试方法、酯酶活性检测法和分子学检测方法在监测抗药性方而进行比较，以期能找到一套快速、简单、准确的抗性检测方法。(4)通过本课题系列实验和指标的观察，建立一套有效、简便的抗性检测方法，同样也可用丁•其他病媒生物的抗性监测，将冇利于及时准确地掌握媒介生物整体抗性水平及其分布，尤其是早期抗性监测，对及时实施抗性治理可争得时间上的主动；不

8、同类型杀虫剂(混氟菊酯、敌敌畏和残杀威)选择压力对kdr的对比观察，将有助于明确重点应治理保护的药剂来源及品种。2.项目完成时达到的技术水平：(1)掌握南昌市不同地区致倦库蚊抗药性水平。(2)了解不同类世杀虫剂选择压力与kdr关系。(3)清楚kdr基因在不同品系致倦库蚊遗传结构屮的状态。(1)了解停用或者换用不同类型杀虫剂对kdr的影响，期望能找到与常用杀虫剂交互抗药性不显著或具负交互抗药性的杀虫