新人教版生物选修1课题1《DNA的粗提取与鉴定》学案一

《新人教版生物选修1课题1《DNA的粗提取与鉴定》学案一》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、DNA的粗提取与鉴定［导学诱思］1.提取DNA的方法提取生物人分了的基木思路是0对于DNA的粗提取而言，就是要利用、等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA,去除其他成分。1）DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利川这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。图5-1是DNA在NaCI溶液中的溶解度曲线，请根据曲线图，思考：%1在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCI溶液中的溶解度是如何变化的？%1如何通过控制NaCI溶液的浓度使DNA在盐溶

2、液中溶解或析出？此外，DNA不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酚能水解,但是对没有彩响。人多数蛋白质不能忍受60-80°C的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对DNA没有影响。3）DNA的鉴定在条件下，DNA遇会被染成色，因此二苯胺口J以作为鉴定DNA的试剂。2.实验设计1）实验材料的选取凡是含有的生物材料都可以考虑，但是使用的生物组织，成功的可能性更大。在下ifii的生物材料中选取适合的实验材料：鱼卵、

3、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、獗猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌思考哺乳动物的红细胞的特点？2）破碎细胞，获取含DNA的滤液动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的，同时用搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的和，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。思考：%1为什么加入蒸饰水能使鸡血细胞破裂?%1加入洗涤剂和食盐的作用分別是什么？%1如果研磨不充分，会对实验结果产牛怎样的

4、影响?%1此步骤获得的滤液11「町能含有哪些细胞成分?3)去除滤液中的杂质阅读课本的三个方案,思考：为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质方案二与方案三的原理有什么不同？4)DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷却.的—，静置，溶液小会出现，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。収两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCI溶液5ml,将丝状物放入具中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管屮各加入4ml的—o混合均匀后，将试管置于中加热5

5、min,待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化•，看看溶解冇DNA的溶液是否变o1.操作提示以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入,防止加入洗涤剂后，动作要、，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加'入酒粹和用玻璃棒搅样时，动作要,以免，导致DNA分了不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要，否则会影响鉴定的效果。2.结果分析与评价［疑难点拨］1.DNA的溶解度与NaCI溶液浓度的关系：当NaCI溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低；当NaCI溶液浓度高于0.14mol/L吋，

6、随浓度升高，DNA的溶解度升高。2.制备鸡血细胞液时，要在新鲜的鸡血中加入柠檬酸钠的原因制备鸡血细胞液时，要在新鲜的鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠，防止血液凝固。其原理是柠檬酸钠能与血浆屮Ca?+发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆屮游离的Ca"人人减少，血液便不会凝固，因为鸡血红细胞，口细胞都有细胞核，DNA主要存在于细胞核中，所以在离心或静置沉淀后，耍弃出上层清液——血浆。3.提取DNA的笫一步是材料的选取，其冃的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会市于实验过程屮或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA

7、的释放和溶解，这-•步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最人限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。4.在DNA的析出的步骤中用到玻璃棒搅拌时，注意动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。5.盛放鸡血细胞液的容器，最好是教料容器。鸡血细胞破碎以示釋放岀的DNA,容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量木来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到

8、的DNA就会更少。因此，实验过程屮最好使用幫料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。［典例解析］本实验中冇三次过滤：（1）过滤用蒸谓水稀释过的鸡血细胞液⑵过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCI溶液⑶过滤溶解有DNA的2mol/LNaCI溶液以上三次过滤分别为了获得（）A含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B含核物质的滤液