广东紫珠核糖体DNAITS序列分子鉴定

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1、广东紫珠核糖体DNAITS序列分子鉴定广东紫珠核糖体DNAITS序列分子鉴定摘耍:采用改良CTAB法提取广东紫珠(CallicarpakwangtungensisChun.)植物总DNA,以通用引物ITS4和ITS5PCR扩增核糖体DNAITS序列，并运用MEGA5.2软件分析ITS序列和构建系统发育树。结果表明，广东紫珠的核糖体DNAITS序列长度为658bp,ITS1和ITS2的长度分别为229.267bp,G+C含量分别为67.39%、70.30%o用町法根据ITS1与ITS2序列构建系统发育树，ITS片段在种间存在差异，可区分紫珠属中不同的种。测序分析和系统发育树构

2、建，能够对广东紫珠进行准确的分子鉴定，为紫珠属屮药材的种类鉴定和种间的分类地位提供分子生物学理论依据。关键词:广东紫珠(CallicarpakwangtungensisChun.);ITS序列；分子鉴定中图分类号:Q78文献标识码:A文章编号:0439-8114(2014)10-2435-05IdentificationofCallicarpakwangtungensisChun,withITSSequencesofNuclearRibosomalDNALIJia-min,JIANGQiong,WANGJian-ming(CollegeofChemicalandBiolog

3、icalEngineering,YichunUniversity,Yichun336000,Jiangxi,China)Abstract:ToidentifyC・kwangtungensisChun,withITSofrDNA,thetotalDNAofthesamplewasextractedwithmodifiedCTAB.TheITSofrDNAwasamplifiedusingapairofprimersITS4andITS5thenwascloned,sequencedandanalyzedbyMEGA5・2.Theresultsshowedthattheleng

4、thofITSofrDNAwas658bp.TheDNAsequenceofITS4was229bpwiththecontentofG+Cof67.39%.TheDNAsequeneeofITS5was267bpwiththecontentofG+Cof70.30%・ThephylogenetictreebasedonITSdatawasconstructed.MolecularidentificationcouldbeperformedonCallicarpakwangtungensisChun.Itwillprovidmolecularevideneefortaxono

5、myandidentificationofdifferentspeciesofCallicarpa.Keywords:CallicarpakwangtungensisChun.;ITSsequences;molecularidentification基金项冃：江四省教育厅青年基金项目（GJJ10252）;江西省天然药物活性成分研究重点实验室开放基金项目广东紫珠（CallicarpakwangtungensisChun.）为马鞭草科紫珠亚属多年生落叶植物，适合生长于海拔100~1000m的丘陵山地，主要分布于江西、湖南、福建、贵州等省，广东和广西等地也有少量分布。广东紫珠的干

6、燥茎、枝、叶均可入药，具有收敛止血、清热解毒等功效,收载于《中国药典》（2010年版），可用于治疗咯血、便血、肺胃出血、崩漏、肺热咳嗽、咽喉肿痛、烧伤、热毒疮、外伤出血等。化学成分研究表明,广东紫珠富含熊果酸、懈皮素、没食了酸、水杨酸等化学成分［1］；药理研究显示具有较强的抑菌作用和显著的止血效果［2］,临床上广东紫珠主要用于治疗宫颈糜烂出血、阴道炎、宫颈炎等,是抗宫炎片、抗宫炎颗粒和抗宫炎胶囊等中成约的主要成分［3］o冃前，市场上对广东紫珠资源需求量很大,原料药材供不应求，由于大量采挖，野生资源锐减，且遭到严重破坏，加上野牛药材质量难以控制,野生资源已不能满足社会需求，对

7、广东紫珠进行资源鉴定和育种成为解决这一问题的关键。准确鉴定广东紫珠有利于指导其育种，因此，有必要在DNA分子水平上鉴定广东紫珠与其他紫珠属植物的种间关系。ITS（Internaltranscribedspacer,ITS）序列是核糖体DNA转录单位的一部分，包括了ITS1、ITS2和5.8SrDNA基因，在被子植物中ITS序列既具有核甘酸序列的保守性和高度变异性。ITS序列分析是近年來国际上植物多样性研究的热点，并在药用植物种质资源研究中得到广泛应用，如药用植物晶种的鉴定、亲缘关系鉴定、药用植物分类、遗传多样性、药