培养基制备和灵敏度检查及无菌检查用培养基方法

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1、培养基制备及灵敏度检查法和无菌检查用培养基培养基应适合需气菌、厌气菌或真菌的生长，可使用符合规定的脱水培养基，均以121°C灭菌30分钟。1.需气菌、厌气菌培养基（硫乙醇酸盐流体培养基）脱水培养基：硫乙醇酸盐流体培养基配方：硫乙醇酸盐流体培养基粉31.0g纯化水1000ml配制：根据需要量称取硫乙醇酸盐流体培养基粉置适宜容器屮，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至7.1±0.2,分装于适宜容器，迸高压灭菌器灭菌121°Cxl5分钟。真菌培养基脱水培养基：改良马丁培养基配方：改良马丁培养基粉28.0g纯化水1000ml配制：根据需要量称取改良

2、马丁培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.4±0.2,分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115°Cx20分钟。真菌琼脂培养基配方：改良马丁琼脂培养基粉42.0g纯化水1000ml根据需要量称取改良马丁琼脂培养基粉，按配方比例加入纯化水，水浴加热使溶解,调pH至6.4+0.2,分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115°Cx20分钟。选择性培养基(1)对氨基苯甲酸培养基(用于磺胺类药物的无菌检查)照上述需气菌、厌气菌培养基及真菌培养基的处方及制法，各加对氨基苯甲酸0.125g,溶解后，摇匀，分装，灭菌。(2)聚山梨酯80培养基(用于油剂

3、约品的无菌检查)照上述需气菌、厌气菌培养基及真菌培养基的处方及制法，各加10ml聚山梨酯80,摇匀，分装，灭菌。营养肉汤培养基脱水培养基：营养肉汤培养基配方:营养肉汤培养基20g纯化水1000ml配制：称取营养肉汤培养基2()克，加1000ml纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌12PCX15分钟。营养琼脂培养基脱水培养基：营养琼脂培养基配方：营养琼脂培养基20g纯化水1000ml配制:称取营养琼脂培养基2()克，加1000ml纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温,分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌12KCX15分

4、钟。培养基质量应通过灵敏度检査。菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保藏屮心获得的冷冻干燥菌种为第0代)，试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性.金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)[CMCC(B)10104]枯草芽砲杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]生孑包梭菌(Clostridiumsporogenes)[CMCC(B)64941]白色念珠菌(Candid

5、aalbicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉(Aspergillusnniger)[CMCC(F)98003]菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽陀杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生陀梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35°C培养18〜24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基屮或改良马丁琼脂培养基上，20〜25°C培养24〜48小时，上述培养物用0.9%氛化钠溶液制成每1ml含菌数小于100CFU(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23〜28

6、°C培养5〜7天，加入3〜5ml无菌的含0・05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液，将陀子洗脱。然后，用适宜的方法吸出砲子悬液至无菌试管内，用无菌的含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液制成每lml含孑包子数小于100CFU的砲子悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存于2〜8°C可在24小时内使用。黑曲霉砲子悬液可保存在2〜8°C,在验证过的贮存期内使用。培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流休培养基9支，分别接种小于100CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌、生砲梭菌各2支，另1支不接

7、种，作为空白对照，置30〜35°C培养3天；取每管装量为9而的改良马丁培养基5支,分别接种小于100CFU的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种，作为空白对照，置20〜25°C培养5天。逐H观察结果。结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。对照用菌液1•金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)菌液取金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］的营养琼脂斜而新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30〜35°C培养16〜18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每lml中含10〜

8、100个菌。1.生葩梭菌(Clostridiumsporogenes)菌液取生砲梭菌［CMCC(B)6494