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《啮齿类小鼠γ-干扰素原核表达、纯化及功能鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、啮齿类小鼠Y-干扰素原核表达、纯化及功能鉴定［摘耍］冃的：构建Y-干扰素的高效原核表达载体，进行Y-干扰素表达、纯化和鉴定，并探索优化啮齿类丫-干扰素的制备工艺。方法：用RT-PCR技术，从ConA活化的小鼠脾细胞屮扩增出mlFN-YcDNA,与原核表达载体pET30a(+)重组，表达和纯化重组蛋口His6-mIFN-Y,并用WesternBlot检测该重组蛋白的生物学活性。结果：构建了啮齿类丫-T•扰素的高效原核表达载体，并实现了Y-T扰素的可溶性表达，且验证该Y-干扰素貝有牛物学活性。结论：成功优化了牛产干扰索的工艺，为国内外进行Y-干扰素研究奠定基础。［关键词
2、］Y-干扰素；原核表达；纯化［中图分类号］TQ929+.1［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2008)01(a)-011-03Prokaryoticexpressionandpurificationofmurineinterferon-gammaLIUXiao-hui,CHENZhuo-jia,DUJun(DcpartmentofMicrobiologyandBiopharmaceuticsinSchoolofPharmaceuticalSciences,SunYat-senUniversity,Guangzhou510080,China)［Abstr
3、act］0bjective:Toclonemurineinterferon-ganimagene,doeffectiveprokaryoticexpressionandpurifyrecombinantmurineIFN-Yforfurtherstudy.Mcthods:Toamp1ifymIFN-YcDNAfromConA-activatodmurinesplenocytosbyRT-PCRandcloneintopET30a(+)vector.ThenthetargetproteinHis6-mIF¥-YwasinducedbyTPTGandpurifiedwi
4、thNi2+-NTAagarose.Thebiologicactivitywasidentifiedbywesternblotting.Results:TheprokaryoticexpressionsystemofmlFN-Ywasconstructed•AndthefusionproteinmIFN-Ywasdissolubleandbioactive.Conclusion:ThetechnologyofmIFN-Yproductionissuccessfullyoptimized.ItlaysafoundationoffurtherresearchofIFN-
5、Y.［KeyWords］TFN^Y:Prokaryoticexpression；Purification英国国立医学研究所的Isancs和Lindonnian在研究病毒的干扰现象吋发现了一种可溶性物质，进一步研究表明这一物质能够抑制多种病簿在细胞内的繁殖，于是将英命名为干扰索(interferons,IFN)［1］。干扰素是一类由低分子可溶性蛋白组成的重要细胞因子,自1957年Isancs首次发现鸡T扰素以來，先后已有人、鼠、犬以及猪等动物的干扰素基因被成功克隆。1FN-Y具有很强的抗病苗舌性、免疫调节活性和抗肿瘤活ttoIFN-y可通过多种途径來发挥抗肿瘤作用，既
6、通过延长细胞周期以延缓肿瘤细胞的牛长和繁殖；乂可通过抑制癌基因的表达来阻止或减慢肿瘤细胞的转化过程；还可诱导肿瘤坏死因了(tumornecrosisfactor-a,TNF-a)上调癌细胞对TNF受体、MHCII类抗原等的表达，使其易被杀伤性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyte,CTL)识别而被杀伤［2］。当病原体侵入机体组织后，淋巴细胞在感染部位聚集并禅放干扰素等细胞因子。IFN-Y主要通过JAK-STAT途径来发挥作用的。IFN-Y与几乎分布于所有正常细胞表血的高亲合力的受体IFN-yR(1FNGR)结合并使受体发生二聚化后，受体的胞内近膜区可与
7、胞浆内非受体TPK-JAK激廨(jsnuskinase)结合并发生磷酸化，进而与信号转导和转录激活因子1(signaltransducersandactivatorsoftranscription,STAT-1)相结合。在JAK催化下，STAT-1结合成活化的STAT-1二聚体转移入核，他们通过与IFN-Y活化位点(gamma-interferonactivationsites,GAS)结合而诱导免疫活性蛋白表达,如CD54、卩引喙胺2,3—二加氧酶［3］(idoleamine2,3-dioxygenase,TDO)等。据资料显示，我国在啮齿类Y-干扰素的克隆、
