大黄(庶-虫)虫合剂对小鼠T细胞亚群影响实验探究

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1、大黄（庶/虫）虫合剂对小鼠T细胞亚群影响实验探究摘要：目的：通过检测黄（庶/虫）虫合剂对实验性免疫低下小鼠及正常小鼠脾脏T细胞亚群的影响。探讨该合剂对免疫功能的调节作用。方法：选取昆明种小鼠100只，雌雄各半。其中50只腹腔注射环磷酰胺1.6mg/0.2mL/只，每天给药1次，连续3天，造成免疫低下小鼠，然后随机分为模型组、中药对照组（六味地黄组）、西药对照组（卡介菌多糖组）、小剂量组、大剂量组；其余50只随机分为正常空白对照组（即生理盐水组）、中药对照组、西药对照组、小剂量组、大剂量组。上述各组连续用药3天后，处死小鼠摘取脾脏，用免疫组化的检

2、测T细胞亚群含量。结果：大黄（庶/虫）虫合剂能显著提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠CD+4、CD+8的百分率及CD+4、CD+8比值（统计学处理P<0.05）o结论：大黄（庶/虫）虫合荆可通过增强小鼠T淋巴细胞的免疫水平。有效地提高集体的免疫功能。关键词：大黄崖虫舍荆；环磷酰胺；免疫调节；T细胞亚群中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号：1673-7717（2007）07-1406-02大黄（庶/虫）虫合剂以仲景名方大黄（庶/虫）虫丸为基础方由大黄、干地黄、（庶/虫）虫、甘草、桃仁等药物组成。具有活血化瘀、缓中补虚之效。临床多用于治疗乙肝

3、、肝硬化、肿瘤等免疫失调性疾病，疗效确凿。但相关的免疫作用机理却少有研究。本实验主要通过观察大黄（庶/虫）虫合剂对小鼠T细胞亚群的影响，探讨其免疫作用机制，为临床治疗提供科学数据。1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物昆明种小鼠100只，体重为（20±2）g,雌雄各半。1.1.2实验药物大黄（庶/虫）虫合剂（将本方药物浸提、净化、浓缩、制成合剂，每瓶100mL。由山西中医学院附属医院制剂室提供）;六味地黄丸（北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂提供，批号为Z19993068,粉碎研磨后，经100目过筛制成散剂）；卡介菌多糖核酸注射液（湖南

4、九芝堂斯奇生物制药有限公司，批号为S20020019）；环磷酰胺（江苏恒瑞医药有限公司提供，批号为403501）。1.1.3实验试剂CD4、CD免疫组化试剂盒（上海森雄1.1.4实验仪器IL-4012-1型回转式切片机（由浙江金华无线电厂提供）；CS-V工型摊片烤片机（由孝感市宏业医用仪器有限公司提供）。1.2实验方法1.2.1试剂配制大黄（庶/虫）虫合剂灌胃液的制备:取大黄（庶/虫）虫合剂加蒸馆水溶解，分别配制成实验所需的低浓度92mg/0.4mL和高浓度368mg/0.4mL溶液。六味地黄灌胃液的制备：取六味地黄丸粉碎后加蒸馆水溶解，配制成

5、浓度为63mg/0.4mL的溶液。卡介菌多糖注射液的制备：将卡介菌多糖配成浓度为0.125mg/0.加L。环磷酰胺注射液的制备：将环磷酰胺加生理盐水配制成浓度为1.6mg/0.2mL的溶液。1.2.2分组及给药将100只小鼠，随机分成两大组:正常实验组和免疫功能低下组，各50只，正常组再随机分成5组（具体剂量参考陈奇主编的《中药药理实验方法学》按体表面积折算方法进行计算：生理盐水组：腹腔注射生理盐水0.4mL/只；中药对照组:六味地黄丸水溶液灌63mg/（0.4mL•只）；西药对照组：腹腔注射卡介菌多糖0.125mg/（0.2mL-只）；小剂量

6、组：低浓度大黄（庶/虫）虫合剂灌胃92mg/（0.4mL•只）；大剂量组：高浓度大黄（庶/虫）虫合剂灌胃368mg/（0.4mL・只）。免疫功能低下组小鼠腹腔注射环磷酰胺每只1.6mg/0.加L,1次/天，连续3天。然后再随机分成5组，其中1组作为环磷酰胺对照组，其余4组分别为环+中药对照组、环+西药对照组、环+小剂量组、环+大剂量组，给药同上述方法，1次/天，连续3天。1.3检测项目与方法最后1次给药24h后，摘眼球处死小鼠，将取出的脾脏固定于10%的多聚甲醛液中6-8h,经酒精梯度脱水后进行石蜡包埋，在IL-4012—t型回转式切片机上将组

7、织切成厚度为4um的薄片，置于CS-VI型摊片烤片机上，将均匀摊片后的组织载于玻片上，静置2min,放于371的烤片机内令其干燥，用免疫组化的方法进行T细胞亚群的测定。显微镜下计数200个细胞，计算阳性细胞（细胞膜着色呈棕黄色）的百分率。1.4统计学方法所有实验数据均以x±s表示，组间检验采用t检验。2结果2.1大黄（庶/虫）虫合剂对正常小鼠T细胞亚群的影响从表1可以看出，中药对照组、西药对照组、实验药物的大小剂量组CD+4、CD+4/CD+8比值均高于生理盐水组（P<0.05,P<0.01）具有统计学意义；实验药物大剂量与小剂量比，组间作用差

8、异性不显著；各组CD+8均无差异。1.2大黄（庶/虫）虫合剂对免疫抑制小鼠T细胞亚群的影响由表2可见，模型组CD+4显著低于生理盐水组，表明免疫抑制动