大肠杆菌生理生化鉴定

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1、大肠杆菌生理生化鉴定1、氧化酶巴氏杆菌1、原理：氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶,氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化,产生颜色反应。2、试剂盐酸二甲基对苯撑二胺（或四甲基对苯撑二胺）1%水溶液于茶色瓶中在冰箱屮贮存。3、方法在干净培养皿里放一张滤纸，滴上二甲基对苯撑二胺的1%水溶液,仅使滤纸湿润即可，不可过湿，用金丝接种环（不可用鎳珞丝）取18-24h的菌苔，涂沫在湿润的滤纸上，在10s内涂抹的菌苔现红色者为阳性，（四甲基对苯撑二胺为蓝色）10~60s现红色者为延迟反应，60s以上现红色者不计，

2、按阴性处理。4、注意事项：a・盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。b.铁、镰珞丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。C・在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性。2、苯丙氨酸脱氨酶变形杆菌1、原理：某些细菌(如变形杆菌)具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸遇到三氯化铁呈蓝绿色。本试验用于肠肝菌科和某些芽泡杆菌属的鉴定。2

3、、培养基酵母膏3gNaCI5gNa2HPO4lgDL■苯丙氨酸2g(或L■苯丙氨酸)lg蒸憾水1000mlpH为7.0,分装试管，121°C蒸气灭菌10min?摆成长斜面。3、试剂10%(W/V)的FeCI3溶液4、方法适当浓度接种，37°C培养4h或8~24h测定。将试剂4~5滴滴到生长菌的斜面上，当斜面上和冷凝水屮产生绿色时为阳性反应，即表明己形成了苯丙酮酸，不变则为阴性。3、H2S(TSI)变形杆菌鸡白痢沙门氏1、原理:有些细菌可分解培养基屮含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。2、培养基:牛肉膏7.5

4、g蛋白腺10gNaCI5g明胶100-120g（或琼脂15g）10%FeCI2（培养基灭菌后无菌加入）5ml蒸馆水1000mlpH7.0,112°C灭菌20min在明胶培养基尚未凝固时，加入新制备的过滤灭菌的FeCI2,用无菌试管分装，培养基高度约为4-5cm,立即置冷水冷却凝固。3、方法用穿刺法接种，30°C培养，1、3、7天，观察，变黑者为阳性，不变为阴性。4、注意事项%1此方法适用于肠杆菌科细菌鉴定%1在实验过程中可用硫酸亚铁代替氯化亚铁%1可同时测定明胶液化，20°C培养4、DNA酶金黄色葡萄球菌1、培养基酪阮水解物15g大豆蛋白月东5gNa

5、CI5gDNA2g甲苯胺蓝O.lg琼脂15g蒸馆水1000ml除DNA和甲苯胺蓝之外，加热熔化后调pH至7.2,加入DNA和甲苯胺蓝，混匀后分装,121°C灭菌30min2、方法%1将培养基倒平板，点接幼龄种于培养皿上，适温培养2天%1结果观察：在接种部位周围出现粉红色晕圈为阳性，沙雷氏菌可作阳性对照5、糖、醇发酵实验［乳糖、纤维二糖、D■阿东醇］1、培养基：蛋白月东水（PH7.6）100ml需要的糖（醇）类lg1.6%漠甲酚紫酒精溶液0.1ml（或0.2%漠麝香草酚蓝酒精溶液1.2ml）制法：1、将所需糖（醇、昔）1克，加入100ml蛋白豚水中，并

6、按比例加入0・5%~0・7%琼脂制成半固体培养基，加热溶解。2、加入1.6%浜甲酚紫酒精溶液0.1ml（或0.2%滉麝香草酚蓝酒精溶M1.2ml）,摇匀。3、分装于试管内，附：蛋白腺水培养基：蛋白月东1克氯化钠0.5克蒸憾水100ml1、将以上成份混合，加热溶解，校正pH至7.4~7・6。2、过滤、分装试管，每管约3mlo2、方法:以18-24h幼龄菌种作种子，穿刺接种，每株2支。同时还耍有标准株和不按种管作对照。37°C培养1、3、5天后观察，如指示剂变黄，表示产酸，为阳性；不变或变蓝（紫）则为阴性。10磅高压灭菌20分钟，检验备用。6、柠檬酸盐利

7、用试验枯草芽砲杆菌1、原理：某些细菌能够利用柠檬酸钠作为碳的唯一来源和无机磷酸镀作为氨的来源，因此能够在含有上述成分的合成培养基上生长，并且分解柠檬酸盐最后生成碳酸盐，使培养基变为碱性。在指示剂漠麝香草酚蓝溶液的存在下，培养基由绿色变为深蓝色。2、培养基：Simmons培养基氯化钠磷酸氢二钾柠檬酸钠蒸谓水lglg1000ml10ml1%漠麝香草酚蓝琼脂20g将除琼脂和誤麝香草酚蓝溶液处的各成分溶解后，调pH值为6.旷7.0,加入琼脂融化，再加入漠麝香草酚蓝溶液，分装试管，经121°C灭菌15min,制成斜面备用。3、方法%1取待检菌在培养基上先划线再

8、穿刺，37°C培养观察2-4d%1结果判定：阳性者在培养基斜面上生长，并HSimmons培养基由草绿色变为蓝