微生物鉴定中常用生理生化试验

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1、微生物鉴定中常用生理生化试验微生物常规生理生化试验摘要利用大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)进行淀粉和油脂实验，证明不同微牛物对各种有机大分子的水解能力的不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子水解实验的原理和方法；使用大肠杆菌(Escherichiacoli)和普通变形杆菌(Proteusvulgaris)进行葡萄糖和乳糖发酵试验，了解糖发酵的原理和在肠

2、道细菌鉴定屮的重耍作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微牛物的方法；利用大肠杆菌(Escherichiacoli)、产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)进行眄W朵试验和甲基红试验，了解两个实验的反应原理以及在肠道细菌鉴定中的意义和方法。关键词生理生化大分子试验糖发酵试验卩引味试验甲基红试验前言微生物代谢与其他生物代谢有着许多相似之处，也有不同之处。微生物代谢重要特征之一，就是代谢类型的多样性，因此使得微生物在自然界的物质循环中起着重要的作用，同时也为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。人们在微生物的分类鉴定工作中，常利用其生理生化反

3、应作用作为重要依据。微生物对大分子淀粉、蛋口质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主耍为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内，这些过程均可以通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同，其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。IMViC试验是口引口朵(i

4、ndoltest)^甲基红(methylredtest)>伏■普(Voges-Prokarertest)和柠檬酸盐(ciratetest)4个试验的缩写，这4个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的细菌检查。1、材料与方法材料1.1.1菌种枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes)、普通变形杆菌(Proteusvulgaris铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusa

5、ureus)o1.1.2试齐I」固体油脂培养基3个、固体淀粉培养基2个、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖培养基试管各3支(内装有倒置的德汉氏小管)、蛋白月东水培养基、葡萄糖蛋白陈水培养基、革兰氏染色用卢戈氏碘染液、甲基红指示剂、乙瞇和眄

6、卩朵试剂等1.1.3仪器和其他用品无菌平皿、无菌试管、接种环、试管架等1.2方法1.2.1淀粉水解试验(1)将淀粉培养基溶化后，冷至50°C左右，以无菌操作制成平板。(2)将制成的平板用记号笔划成四部分，将、枯草芽抱杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌分别在不同部位无菌操作画接种,并在4部分上写上菌名。(3)将上述已

7、接种的平板倒置于37°C温室中培养48小时。(4)将已培养48小时的平皿取出，打开皿盖，滴加少量卢戈氏碘液于平板上，轻轻旋转平皿，使碘液均匀铺满整个平板。1.2.2油脂水解实验(1)将溶化的油脂培养基冷至50°C左右时，充分振荡，使油脂均匀分布,用无菌操作倒入平皿中，待凝。(2)将制成的平板用记号笔划成四部分，分别以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌和大肠杆菌作为试验菌，均用无菌操作画接种，并在4部分上写上菌名。⑶将接种的平板倒置于37°C温室中培养48小时。(4)取出平板，观察平板底层长菌的地方，如出现红色斑点，说明脂肪被水解，为阳性反应。1

8、.2.3葡萄糖发酵试验和乳糖发酵试验(1)用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养基名称和所接种的细菌菌名。(2)取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接种标记变形杆菌和大肠杆菌，第三支不接种，作为对照。另取乳糖发酵培养基试管3支，同样分别接入变形杆菌和大肠杆菌，第三支不接种，作为对照。接种后，轻缓摇动试管，使其均匀,防止倒置的小试管进入气泡。(1)将接种过和作为对照的6支试管置于37°C恒温培养箱培养48ho(2)观察各试管颜色变化以及德汉氏小管中有无气泡1.2.4卩引喙试验和甲基红试验(1)将大肠杆菌和产气肠杆菌分别接入2支蛋白腺水培养基(口引嗥试验)、2

9、支葡萄糖蛋白月东水培养基(甲基红试验)。(2)将接种过的4支试管置37°C恒温培养箱培养48h