微生物常规鉴定技术――生理生化试验3

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1、微生物常规鉴定技术一生理生化试验录入时

2、'h］：2010-11-129:48:24來源：青岛海博微生物生化反应是指用化学反应來测定微生物的代谢产物，生化反应常用來鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微牛物。因此微牛物牛化反应是微牛物分类鉴定中的亜要依据微生物检验中常用的生化反应有：1、糖酵解试验不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。试验方法：以无菌操作，川接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置36±1.0°C培养，每

3、天观察结果，检视培养棊颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力、培养物可呈弥散生长。木试验主要是检杏细菌对各种糖、醇和糖井等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常丿IJ的指示剂为酚红、漠甲酚紫，漠白里蓝和Aivdrade指示剂。2、淀粉水解试验某些细菌可以产牛分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或衙萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。试验方法：以18〜24h的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜而或平板（一个平

4、板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种丁漩粉肉汤中，于36±1弋培养24~48h,或于20。培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表血，若为液体培养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明坏、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酚的能力、培养时间，培养基含有淀粉量和pH等均有一定关系。培养基pH必须为屮性或微酸性，以pH7.2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临川时制备为妥。3、V-P试验某些细菌在葡萄

5、糖蛋白J］东水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱竣成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境卞，被空气屮氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋口腺屮的弧基生成红色化合物，称V-P（+）反应。试验方法：1）0Meara氏法:将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h,培养液lml加OMeara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸STCreatinine的40%氢氧化钠水溶液）Iml,摇动试管l~2min,静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h内不呈现伊纟［：、即判定为阴性。亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。2）Barritt氏法：

6、将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Ca^酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml,再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml,摇动2〜5min,阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。1）快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管屮、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种坏，乳化接种于其中，加入5%-蔡酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min,判定结果。不产酸的培养物不能使用。本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄

7、球菌等其它细菌时，通川培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠代替。4、甲基红（MethylRed）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产牛丙酮酸，进一步分解中，rti于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醴酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。试验方法：挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用培养基，培养J:36±1°C或30七（以3（TC较好）3〜5天,从第二天起,每日取培养液lml,加甲基红指示剂1〜2滴，阳性呈鲜红色,弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5

8、天仍为阴性、即可判定结果。甲基红为酸性指示剂，pH范鬧为4.4〜6.0,其pK值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强黄色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。5、靛基质（Imdole）试验某些细菌能分解蛋白腺中的色氨酸，生成财喙。眄卩朵的存在可用显色反应表现出来。II引味与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰忧味，为红色化合物。试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养基管，于36±1C培养24h时后，取约2ml培养液，加入Kovacs氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性

9、，或先加少量乙讎或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表血后，再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接