内毒素检查方法

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1、葡萄糖酸钙中细菌内毒素检查方法标准操作程序1.口的：建立葡萄糖酸鈣屮细菌内毒素检查方法标准操作程序，规范操作。2.使用范围：中心化验室3.冇关责任：屮心化验室化验员对本规程实施负责，化验室主任对本规程的冇效执行承担监督检查责任。4.程序：木法系利用蛍试剂与细菌内毒素产牛凝集反应的机理，以判断葡萄糖酸鈣样詁屮细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。内毒素的量用内毒素单位EU表示。4丄试验材料及工具4.1.1分析犬平4.1.2电热干燥箱（180-300°C）4.1.3恒温培养箱型号4.1.4旋涡混合器4.1.

2、5微量移液器200~1000UI50^200UI4.1.6无热源吸头、大号、小号、试管架、封口膜4丄7蛍试剂（应具有国家主管部门的批准文号，我公司常用湛江安度斯）4.1.8细菌内毒素检查用水（BET水）4.1.9细菌内毒素工作标准品4.1.10无热源的小试管10X75mm或无热源安培4.1.11无热源的小试管15X100mm及无热源药匙4.2操作方法4.2.1实验准备将所有玻璃器血及药匙用洗液（包括三效灭活剂）渗泡4小时以上，用清水及纯化水冲洗后，置250°C烤箱中干燥60分钟以上或置121°C（蒸汽压力

3、为0.105Mpa）热压灭菌1小时。试验过程中应防止微生物的污染。4.2.2葡萄糖酸钙样品的准备精密称定样品0.0g~0.04g于无热源的15X100mm小试管中,加BET水稀释成0.01g/ml,在水溶中加热，置自动旋涡混合器中使样品溶解后，再至少混合30•秒（指原液C）。例：样品重0.0220g,加（BET水）2.2ml,使成O.Olg/mL4.2.3内毒素工作标准溶液的制备取细菌内毒素工作标准品1支，加入2ml（BET水），用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟，然后制成所需浓度的内毒素标准

4、溶液（2.0入、入、0.5X.0.25X）每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒。例：细菌内毒素工作标准品为50EU/支，加I（BET水）lml即50EU/ml,如实验要求蛍试剂灵敏度为0.25X,那么细菌内毒素标准溶液应当为2X0.25入二0.5入，即0.5EU/ml.应按以下方式进行稀释：0.3ml0.5mllmllml50EU/ml—5EU/ml-*lEU/ml0.5EU/ml0.25EU/ml2.7ml2.0mllmllml4.2.4根据L值邙艮值），确定样品稀释倍数冇效稀释倍数二L/入例:L值为

5、100EU/g,蠻试剂的灵敏度0.25EU/mlo100EU/g-C100EU/g-O.Olg/ml有效最大稀释倍数二=4倍X0.25EU/ml即吸原液0.4mlX4=1.6ml（总体积）1.6ml-0.4ml=1.2ml（BET水）4.2.5蛍试剂的准备在制备内毒素的同吋，取蛍试剂3支，按蛍试剂规格加入BET水复溶，轻轻转动瓶壁，使内溶物充分溶解，避免产生气泡，本公司所用规格为0.25EU/ml加水0.1ml复溶。其中2支加入0.1ml按最大游戏稀释倍数的供试品溶液作为供试品管，1支加入O.lmIBET

6、水，将细菌内毒素工作标准品制成的2.0X浓度的内毒素溶液作为阳性对照管，1支加入0.1mlBET水作为阴性对照管，1支加入0.1ml供试品阳性对照溶液（用被测供试品溶液将同1支（瓶）细菌内毒素工作标准品制成2.0X浓度的内毒素溶液）作为供试品阳性对照管，即（PPC管）。加样结束后，封口，轻轻混合避免产生气泡，放入37±TC的恒温装置内保温60±2分钟,保温和取试管过程屮应避免受到振动造成假阴性结果。结杲判断：将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180。，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）;凝

7、胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（-）,应认为符合规定；如2支均为（+）,应认为不符合规定；如2支屮1支卫（+）,1支为（-）,按上述方法另取4支供试品管复试，，4支中1支为（+）,即认为不符合规定。阳性对照管为（・）或供试品对照管为（・），阴性对照管为（+）,试验无效。注意事项：新购入蛍试剂，BET水，细菌内毒素工作对照晶都做蛍试剂灵敏度复核试验。