云南省地中海贫血基因携带者及患者α和β珠蛋白基因突变谱与产前基因诊断

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1、云南省地中海贫血基因携带者及患者a和B珠蛋白基因突变谱与产前基因诊断地中海贫血(地贫)是由于珠蛋白基因突变或缺失而导致一条或多条珠蛋白肽链的合成障碍或结构异常，致使组成血红蛋白(Hb)的珠蛋白链比例失衡，从而引起红细胞损伤和溶血的贫血性疾病。重型地贫患儿常常因慢性溶血性贫血而造成过高的铁离了负荷和沉积，逐渐导致肝脾肿大、肝纤维化、内分泌紊乱、骨骼发育异常、心肌损害、心功能衰竭，最终治疗无效死亡;中间型地贫患者也会因持续的慢性溶血性贫血而出现生长发育不良、体能低于健康人，长期处于患病和亚健康状态。冈而，地贫是严重彩响流行地区人口质量的遗传病,成为

2、地贫各流行区的重大公共卫生问题。云南省地贫的发病率较高,既往对云南省人群的地贫研究均局限在个别地区、个别少数民族人群的抽样调查，对云南省地贫的珠蛋白基因突变谱缺乏较大规模的调查资料，难以建立有效的地贫产前基因诊断措施。本研究对云南省地贫患者和地贫基因携带若中a和卩珠蛋片基因突变谱进行了检测,现将结果报道如下。资料与方法一、资料来源1•资料收集:收集2009年7月・2011年7月云南省中部、西部、南部、北部、东部等5个地区的10033例孕前咨询夫妇、孕妇及F列贫血患儿的资料。记录受检者姓名、民族、籍贯、年龄等信息,Hb电泳、血常规检测结果资料和基

3、因诊断结果，由云南省出纶缺陷与遗传病研究重点实验室汇总后输入Excel软件数据库中保存。2•受检者纳人标准:10055例受检者经门诊检测血常规和Hb电泳，按照文献确定血液学筛查表型阳性:(1)平均红细胞体积(MCV)<80n,平均红细胞Hb含量(MCH)<刀18・(为小细胞低色素性贫血);(2)正常成人男性Hb含量(HGB)<120g/L,正常成人女性HGBS110g/L(为贫血患者);(3)成人型HbA2<2.5%为a地贫可疑，可出现某些特殊的异常Hb带;⑷HbA2>3.5%为卩地贫可疑，可伴有胎儿型血红蛋白(HbF)>2.0%,可出现某些特

4、殊的异常Hb带。满足以上4项中的1项即为血液学筛查表型阳性。10055例受检者中血液学筛查表型阳性者1077例，对这1077例阳性者进行a或卩珠蛋口基因突变谱检测，双重杂合了按2条突变染色体计算。3•标本采集:受检者进行血常规或其他项冃检查时抽取静脉血2ml,枸椽酸钠抗凝,4〜8°C冷藏保存1〜5d内检测。外地送检标本釆用4〜8°C冷藏箱运输,采血后1〜5d内检测。本研究符合本院医学伦理委员会所制定的伦理学标准，并获得该伦理委员会批准，所有受检者必须征得本人(成人)或患儿家长知情同意，并签署基因检测知情同意书。二、基因诊断方法l.a或卩珠蛋白基

5、因突变的检测:采用PCR-寡核昔酸探针反向斑点杂交法(PCR.RDB)检测P珠蛋口基因(深圳亚能生物技术有限公司生产的地贫基因诊断试剂盒)常见17个位点的18种突变(其中iVS-lntl有两种形式的点突变):CD41〜42(-CTTT)、lVS・2nt654(c—T)、-28(A_G)>CD71〜，'(+A)、CD17(A—>T)>CD。b(G〜tA)、CD(C)、CD夕〜2:(+c)、CD妇(GtT)J2(CtA)、・29(A—G)、-30(T—C)、CD14〜15(+G)、CAP+1(A・—T)、IntATG—AGG、IVs〜1nd(GfA

6、,G—T)及IVS・In6(G—C);采用单管多重跨越断裂点PCR(gap甲CR)技术检测3种常见的缺失型a珠蛋自基囚突变，即东南亚缺失型(「SEA)、右缺失型@37)、左缺失型(-a42),以及用PCR-RDB法检测a地贫的常见3种点突变即aCSa>aQSa和aWSa。每次检测均同时进行空白对照和阳性对照。2.a或卩珠蛋白基因编码区测序:由深圳华人基因研究院进行a或卩珠蛋白基因的编码区测序，测序结果与人类异常Hb病和地贫数据库中a或卩珠蛋白基因序列进行比对［9］撚后根据异常SNP位点或插入或缺失(iII/del)的位置按照文献的命名法命名基因

7、突变类型。三、产前基因诊断对受检者中夫妇二人均为同种珠蛋白基因突变携带者，或者有重型地贫及HbH病患儿生育史的孕妇再次妊娠时进行产前基因诊断。于妊娠16r周时抽取羊水101111。外周血和羊水均用盐析法提取DNA,置于・2(VC保存各检。结果一、a珠蛋白突变基因类型及其检出顺位1077例血液学筛查表型阳性者中，检出347例a地贫患者或地贫基因携带者，仅对其中的119例阳性受检者进行了a珠蛋白基因缺失和突变谱检测，共检测出5种Q珠蛋口基因缺失和突变，其中1“例为「SEA、a37、aCSa.-a424利】常见的a珠蛋白基因缺失突变和点突变的基囚携带

8、者，14例为双重杂合子的HbH病和重型a地贫患者,1例a地贫携带者中检测岀罕见的B珠蛋白基因内含子的插人缺失突变a-二、B珠蛋口基因的突变类型及其检出